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氨基己糖苷酶Bβ(HEXb)重組蛋白

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更新時間:2023-03-31 15:23:56瀏覽次數(shù):486

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 詳見說明書
應用領域 化工 主要用途 科研
英文名稱 Recombinant Hexosaminidase B Beta (HEXb) 物種 Homo sapiens (Human,人)
來源 原核表達 應用 Cell culture; Activity Assa
氨基己糖苷酶Bβ(HEXb)重組蛋白的相關產品:蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達 性狀:凍干粉 泛素樣修飾激活酶3(UBA3)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達 性狀:凍干粉 核糖核酸酶A10(RNASE10)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人)

詳細介紹

標簽選擇:

親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHOHEK293

b.      表達載體的構建

c.      無內毒素的質粒抽提

d.      細胞瞬時轉染

e.      表達小試,條件優(yōu)化

f.       表達分析和鑒定(SDS-PGAEWB

g.      大量表達

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

僅供科研實驗產品屬性:

產品名稱

物種

性狀

來源

氨基己糖苷酶Bβ(HEXb)重組蛋白

Homo sapiens (Human,人)

凍干粉

原核表達

英文名稱:Recombinant Hexosaminidase B Beta (HEXb)

Hex-B; ENC-1AS; HCC-7; Beta-N-acetylhexosaminidase subunit beta; Cervical cancer proto-oncogene 7 protein; N-acetyl-beta-glucosaminidase subunit beta

酶與激酶 代謝通路 腫瘤免疫 神經(jīng)科學

物種:Homo sapiens (Human,人)

來源:原核表達

宿主E.coli

內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位::Lysosome

預測分子量:17.8kDa

實際分子量:16kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽:Lys315~Tyr456 (Accession # P07686) with

緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% TrehaloseProclin300.

性狀:凍干粉

純度:> 95%

等電點:5.4

應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

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1.png

原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉化表達菌株

e.      蛋白表達小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測

  誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

操作步驟 :

根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

禽偏肺病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian Metapneumovirus(aMPV)RTPCR 50T

禽網(wǎng)狀內皮組織增殖病病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV)RTPCR 50T

禽正呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian OrthoreovirusRTPCR 50T

球孢白僵菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Beauveria bassianaPCR 50T

TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein) Tar DNA 結合蛋白43抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

Anti-BRMS-1 癌轉移抑制基因1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh PDZK3 前列腺癌激活蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

CD29 濃縮液 0.1ml 進口分裝

Telomerase Binding Protein, P23 英文名稱: 端粒酶結合蛋白P23抗體 0.1ml

CD8 alpha 英文名稱: CD8抗體 0.1ml

Anti-BRMS-1 癌轉移抑制基因1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

氨基己糖苷酶Bβ(HEXb)重組蛋白腦粘體蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Myxosoma cerebralisPCR

尼泊爾葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus nepalensisPCR

擬態(tài)弧菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Vibrio mimicusPCR

捻轉毛細線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Capillaria contortaPCR

注意事項:  

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。

2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作


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