詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zein基因探針法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | Standard zein gene probe qPCR kit in Maize |
貨號(hào) | YSP96944 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
胰多肽(PP) 規(guī)格:0.1g 英文:IL1F9
胰多肽2(PPY2) 規(guī)格:0.1g 英文:IL1θ
胰安肽(Aglycin) 規(guī)格:0.1g 英文:IL1η
胰島素(INS) 規(guī)格:0.25g 英文:IL1ζ
胰島素(INS) 規(guī)格:0.25g 英文:IL1ε
胰島素(INS) 規(guī)格:20mg 英文:FIL1δ
胰島素(INS) 規(guī)格:0.5g 英文:IL1β
胰島素(INS) 規(guī)格:0.25g 英文:IL1α
胰島素(INS) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 英文:IL19
胰島素(INS) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 英文:IL18RAP
胰島素(INS) 規(guī)格:HPLC≥98%;5mg 英文:IL18R1
胰島素自身(IAA) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 英文:IL18BP
胰島素自身(IAA) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 英文:IL18
胰島素自身(IAA) 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 英文:IL17RA
胰島素受體(ISR) 規(guī)格:HPLC≥98%;10mg 英文:IL17F
Isosteviol5’-尿苷酸二鈉(UMP) 分子式:C32H52O3 純度:%
Spiratisanin CdAMP-Na2;脫氧腺苷磷酸二鈉 分子式:C30H48O3 純度:98.0%
Spiratisanin BATP.Na2; 腺苷-5’-三磷酸二鈉鹽水合物 分子式:C32H54O3 純度:96.0%
Spiratisanin A阿帕替尼甲磺酸鹽 分子式:C32H52O4 純度:95.0%
Siegeskaurolic acidcAMP;環(huán)磷酸腺苷,環(huán)腺苷酸,環(huán)磷腺苷 分子式:C30H48O3 純度:96.5%
Pseudolaric acid B環(huán)磷酸腺苷,環(huán)腺苷酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C36H56O11 純度:98.0%
6β-Hydroxyhispanone5'-胞苷酸(CMP) 分子式:C37H60O8 純度:96.0%
Sugeroside5-甲酰水楊酸 分子式:C30H46O3 純度:%
10-DeacetylyunnanxaneD-核糖-5-磷酸二鈉鹽 分子式:C30H48O2 純度:98.0%
玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zein基因探針法qPCR試劑盒組蛋白去乙?;?1抗體 英文縮寫:HIV p55+NP7
磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 英文縮寫:HIV p55+P6-Gag
HHO1蛋白抗體 英文縮寫:HIV1 gp120
磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體 英文縮寫:HIV1 gp160
磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 英文縮寫:HIV1 p55 + p17
磷酸化組蛋白H1.4抗體 英文縮寫:HIV1 p55+p17
羥酰谷胱甘肽水解酶蛋白抗體 英文縮寫:HIV1 p55+p24+p17
磷酸化組蛋白去乙?;?抗體 英文縮寫:HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)
人巨細(xì)胞病毒抗體 英文縮寫:HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)
磷酸化組蛋白去乙?;?/5/7抗體 英文縮寫:HIV2 gp120 + gp160