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公司主營:elisa試劑盒、ATCC細(xì)胞、微生物菌種、各種生化試劑、分子生物學(xué)、抗體、血清、熒光試劑盒等等。客戶可向我們咨詢您所需的產(chǎn)品、數(shù)量,我們誠摯希望能與您合作。
T4 DNA連接酶產(chǎn)品詳情:
T4 DNA連接酶
英文名稱:T4 DNA Ligase
CAS號(hào):9015-85-4
分子量:55.3kDa,單體
級(jí)別:BR
來源:含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
活性定義:是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中,37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量(weiss單位,1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。1個(gè)粘性末端連接單位:20ul反應(yīng)體系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量)
抑制劑:當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時(shí),可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活:65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意:T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,為避免此現(xiàn)象,電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下:樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存;轉(zhuǎn)化時(shí),連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%;電轉(zhuǎn)化之前,先用氯方抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase,然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
質(zhì)量控制:測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測:粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀(以下信息僅供參考):液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口,連接DNA的粘性和平末端,但該酶對(duì)單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途:本品僅供科研,不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接;雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接;雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù);連接酶介導(dǎo)的RNA檢測;位點(diǎn)特異性突變;擴(kuò)增片段長度多態(tài)性
保存: -20°C
T4 DNA連接酶穩(wěn)定性判斷原則:
1.無機(jī)化合物,只要妥善保管,包裝完好無損,可以長期使用。但是,那些容易氧化、容易潮解的物質(zhì),在避光、蔭涼、干燥的條件下,只能短時(shí)間(1~5年)內(nèi)保存,具體要看包裝和儲(chǔ)存條件是否合乎規(guī)定。
2.有機(jī)小分子量化合物一般揮發(fā)性較強(qiáng),包裝的密閉性要好,可以長時(shí)間保存。但容易氧化、受熱分解、容易聚合、光敏性物質(zhì)等,在避光、蔭涼、干燥的條件下,只能短時(shí)間(1~5年)內(nèi)保存,具體要看包裝和儲(chǔ)存條件是否合乎規(guī)定。
3.有機(jī)高分子,尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料,極易受到微生物、溫度、光照的影響,而失去活性,或變質(zhì),故此,要冷藏(凍)保存,而且時(shí)間也較短。
4.基準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和高純物質(zhì),原則上要嚴(yán)格按照保存規(guī)定來保存,確保包裝完好無損,避免受到化學(xué)環(huán)境的影響,而且保存時(shí)間不宜過長。一般情況下,基準(zhǔn)物質(zhì)必須在有效期內(nèi)使用。
試劑提純方法:
①蒸餾。對(duì)于易揮發(fā)的試劑,如常用的無機(jī)酸,有機(jī)溶劑等是最常用的提純方法。根據(jù)沸點(diǎn)的高低選用常壓或減壓蒸餾法。
②升華。對(duì)于某些易升華的試劑,如碘、萘等,此法最簡便。
③重結(jié)晶。適用于大多數(shù)固體試劑的提純,其關(guān)鍵是選擇好合適的溶劑。
④溶劑萃取。無論將母體或雜質(zhì)萃取到有機(jī)溶劑相中,均可達(dá)到提純的目的。
⑤離子交換色譜分離。是一種新型的高效提純方法,例如,用陰離子交換樹脂吸附清除鹽酸中的鐵(FeCl4-)。此外,還有薄層層析、電滲析、區(qū)域熔融、離子交換膜等特殊手段來分離提純化學(xué)試劑。
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OCTYL-THIOGLUCOSIDE辛基-β-D-硫代葡萄糖苷超純級(jí)白色固體FRZsigma
聚烯亞安 50% in water POLYqTHYLqNqIMINq, BRcNCHqD 900-98-6
乙醛脫氫酶/Aldehyde Dehydrogenase, potassium-activated BR,2u/mg 25U 國產(chǎn)/進(jìn)口
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