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技術(shù)文章

干細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法

閱讀:603          發(fā)布時間:2018-5-15

目前,血清仍是干細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。

為了使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng),關(guān)鍵的是將所培養(yǎng)細胞:

1.處于對數(shù)生長中期

2.>90% 活細胞率

3.適應(yīng)時以較高的起始細胞接種

以下是細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的使用方法:

*、直接適應(yīng)——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。

第二、連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?/p>

(1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。

(2)當細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×105到3×105細胞/ml細胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

(3)以2×106到3×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。 (4)當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

(5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

在實驗后這些干細胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。

Saccharin 200mg 糖精標準品 1981/7/2

Gibberellic Acid 200mg 赤霉酸標準品 1977/6/5

Galantamine Hydrobromide 200mg 氫溴酸加蘭他敏標準品 1953/4/4

Procaine Hydrochloride 200mg 鹽酸普魯卡因標準品 1951/5/8

Metharbital CIII 200mg 美沙比妥標準品 1950/11/3

200mg 阿立哌唑標準品

Almotriptan Malate 200mg 阿莫曲坦標準品

200mg 波生坦標準品
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