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技術(shù)文章

原代細(xì)胞染色體標(biāo)本制作

閱讀:239          發(fā)布時(shí)間:2018-6-5

一、原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?nbsp;
通過這一實(shí)驗(yàn),要求學(xué)生了解哺乳動(dòng)物染色體標(biāo)本的制作方法,并對動(dòng)物染色體進(jìn)行觀察。 
二、實(shí)驗(yàn)原理 
由于小鼠四肢骨內(nèi)骨髓細(xì)胞中的造血干細(xì)胞是生成各種血細(xì)胞和原始細(xì)胞,具有高度的分裂能力,本實(shí)驗(yàn)采用這一材料,通過前處理,低滲,固定,制片,染色等步驟制得染色體標(biāo)本,可觀察到許多處于分裂中期的染色體,可以進(jìn)行染色體組型分析。 
三、實(shí)驗(yàn)用品 
1.材料:小白鼠
2.器具:注射器(1ml,5ml)、5號針頭、解剖盤、解剖剪、鑷子、玻璃吸管、10ml刻度的離心管、離心機(jī)、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、濾紙、擦鏡紙、棉花、量筒、天平、恒溫水浴鍋 
3.藥品:0.01%秋水仙素、0.075MKCl、固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、Giemsa染液、0.01M磷酸緩沖液(PH6.8),0.85%生理鹽水。 
四、實(shí)驗(yàn)步驟 
1.預(yù)處理:實(shí)驗(yàn)前2.5-3小時(shí),按每克體重注射0.02ml,給小白鼠腹腔注射秋水仙素。 
2.?dāng)囝i處死動(dòng)物,解剖小鼠內(nèi)生殖器官,鑒別雌雄性別。 
3.剝?nèi)」晒?,剔去肌肉組織,剪去兩端的股骨頭 
4.沖洗骨髓:吸取0.6ml生理鹽水,注射器針頭插入股骨一端,反復(fù)沖洗骨髓到8ml的離心管中. 
5.低滲:加入4.4ml0.075MKCl溶液,37oC水浴低滲40分鐘,中間(約20分鐘)用吸管吹打一次,使細(xì)胞分散,懸浮于溶液中。 
6.離心:1000rpm離心10分鐘后棄去上清液,離心之前加1ml固定液并用吸管輕輕吹勻,進(jìn)行預(yù)固定。
7.固定I:沿管壁慢慢加入固定液5ml,用吸管吹打成細(xì)胞懸液后,室溫下靜置30分鐘,15分鐘時(shí)吹打一次。
8.離心:1000rpm離心10分鐘,棄上清液。 
9.固定II:同固定I。 
10.離心:同8離心后加0.3-0.5ml固定液,吸管吹打成細(xì)胞懸液。 
11.滴片:用吸管吸取細(xì)胞懸液,滴在預(yù)冷的載玻片上,在酒精燈火焰上微微加熱,室溫晾干
12.染色:10% Giemsa染液染色30分鐘; 
鏡檢:低倍———高倍 。 
五、注意事項(xiàng) 
低滲與離心等步驟的操作要輕。 
觀察細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為:
1.細(xì)胞完整,輪廓清晰,染色體分布在同一水平面上。
2.染色體形態(tài)和分布良好。
3.無重疊,即使有個(gè)別重疊,也要能明確辯認(rèn),以免差錯(cuò)。
4.所觀察的細(xì)胞處于同一有絲分裂階段,即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣。
在所觀察的原代細(xì)胞周圍,沒有離散的單個(gè)或多個(gè)染色體存在,以免影響計(jì)數(shù)。

5 x 10^5 cells/vial 人支氣管上皮細(xì)胞 HBEpiC

5 x 10^5 cells/vial 人氣管上皮細(xì)胞 HTEpiC

5 x 10^5 cells/vial 人小氣道上皮細(xì)胞 HSAEpiC

5 x 10^5 cells/vial 人肺成纖維細(xì)胞 HPF

1 x 10^6 cells/vial 人肺成纖維細(xì)胞 HPF

5 x 10^5 cells/vial 人支氣管平滑肌細(xì)胞 HBSMC

5 x 10^5 cells/vial 人氣管平滑肌細(xì)胞 HTSMC

5 x 10^5 cells/vial 人支氣管成纖維細(xì)胞 HBF

5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌細(xì)胞 HSkMC

5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞 HSkMSC

5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌成肌細(xì)胞 HSkMM
原代細(xì)胞

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