技術(shù)文章
進(jìn)口elisa試劑盒技術(shù)和WESTERN的不同?
閱讀:326 發(fā)布時間:2018-8-17進(jìn)口elisa試劑盒Western Blot與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。
免疫學(xué)三大工具,免疫組化、Western、ELISA,分別用于定位,定性和定量,各有各的功能。
Western用于測分子量,ELISA用于測濃度。
他們在測量前都要一個尺子(標(biāo)準(zhǔn)),但Western的尺子上標(biāo)的是分子量(KD),ELISA的尺子上標(biāo)的是濃度。
Western用的是蛋白MARKER(已知大小的幾條蛋白),與蛋白一起電泳(不同泳道),實驗結(jié)束后知道目標(biāo)蛋白的大小。
進(jìn)口elisa試劑盒用的是標(biāo)準(zhǔn)品(已知濃度的蛋白,自己稀釋成不同濃度),與未知相本一起反應(yīng)(不同孔),實驗結(jié)束后判斷目標(biāo)蛋白的濃度。
至于他們的后期原理,都是用抗體與目標(biāo)蛋白反應(yīng),再加一個HRP標(biāo)記的二抗,HRP可以讓DAB顯色(Western是DAB或者ECL發(fā)光,在膜上顯色,而ELISA用TMB顯色,顏色在孔里面,)
當(dāng)然,實際操作也沒這么簡單,但后期利用的原理是相當(dāng)?shù)摹?/p>
KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體 SSDD/Steroid sulfatase
KT3 tag抗體 SSB/La
k輕鏈抗體 SSA/52KDa Ro
Lgr5/GPR49抗體 srGAP3
LIX1抗體 SRG11/Spata17
Lpin1 抗體 SREBP-2
Lpin1 抗體 SRF/SAP2/MCM1
LRIG1抗體 SREBP-1
LRIG2抗體 SRC
LRIG3抗體 SPY
LY75抗體 Spindlin 1
L-瓜氨酸抗體 SPHK2
進(jìn)口elisa試劑盒