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鳩寧病毒PCR檢測試劑盒使用方法及實驗操作洗板方法
閱讀:261 發(fā)布時間:2021-3-18鳩寧病毒PCR檢測試劑盒使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗操作洗板方法
1.手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。
2.自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
說明
1.在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結果。
2.濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3.剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。
4.所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
5.有效期:6個月。
6.本操作說明適用于48T試劑盒,但48T試劑盒所有試劑減半。
7.電子版說明書僅供參考,實際操作請按照隨產品發(fā)送的印刷版說明書;中英文說明書可能會有不*的地方,以英文說明書為準。