詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞系來自一男性胎兒的正常肺組織,1986年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Human T-box protein 3 ELISA Kit(human) 人轉(zhuǎn)錄因子Tbx3 ELISA試劑盒Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-SSTR5 生長抑素受體5抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格 0.3ml
Human c-jun ELISA Kit 人c-jun 96T
C9orf156 英文名稱: 9號染色體開放閱讀框156抗體 0.1ml
BATF 英文名稱: B細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子抗體 0.1ml
Anti-SSTR5 生長抑素受體5抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VEGF-B(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor B) ELISA KIT 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子BMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GHR 生長激素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG 小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 1mg
HSP gp96(Human Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit 人熱休克蛋白糖蛋白96 96T
RAMP3 英文名稱: 受體活性修飾蛋白3抗體 0.2ml
phospho-Beta catenin (Tyr86) 英文名稱: 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 0.1ml
Anti-GHR 生長激素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)ELISA試劑盒,英文名:HIF2α ELISA KiISA Kit for Human Sodium/calcium exchanger 1大鼠內(nèi)分泌腺來源血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒,英文名:EG-VEGF ELISA KiISA Kit for Human Tryptophan 5-hydroxylase 2大鼠含纈酪肽蛋白(VCP)ELISA試劑盒,英文名:VCP ELISA KiISA Kit for Human Polyubiquitin-B大鼠成纖維細(xì)胞生長因子3(FGF3)ELISA試劑盒,英文名:FGF3 ELISA Kit大鼠N-myc下游調(diào)節(jié)基因2(NDRG2)ELISA試劑盒,英文名:NDRG2 ELISA Kit豚鼠調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)ELISA試劑盒,英文名:RANTES ELISA KiISA Kit for Human Aquaporin-9小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒,英文名:VCAM-1/CD106 ELISA Kit
ELISA Kit for Human Interleukin-36 gamma小鼠白介素6(IL6)ELISA試劑盒,英文名:IL6 ELISA KiISA Kit for Human Corticotropin小鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒,英文名:β-CG ELISA KiISA Kit for Human Brain-derived neurotrophic factor小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒,英文名:TRACP-5b ELISA KiISA Kit for Human Putative ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit, mitochondrial小鼠肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)ELISA試劑盒,英文名:L-FABP ELISA KiISA Kit for Human Chitinase-3-like protein 1小鼠白介素15(IL-15)ELISA試劑盒,英文名:IL-15 ELISA KiISA Kit for Human Protein CYR61小鼠4-羥基壬烯酸(HNE)ELISA試劑盒,英文名:HNE ELISA Kit人白介素13受體α-2(IL13RA2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠Smad同源物7(Smad7)ELISA試劑盒,英文名:Smad7 ELISA Kit
兔抗親和素純化抗體 1mg/10mg 國產(chǎn)
YES1 英文名稱: 原癌基因酪酸蛋白激酶Yes1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Raf(Ser339) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 規(guī)格 0.1ml
HA tag HA tag標(biāo)簽多肽Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DRD4 英文名稱: 多巴胺受體D4抗體 0.2ml
TFRC Transferrin Receptor / TFRC / CD71 兔單抗 (PE) Human
VZV-IgG(Human Varicella zoster virus IgG) ELISA Kit 人水痘帶狀皰疹病毒IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Kiss-1 轉(zhuǎn)移抑制基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh LASS5 長壽相關(guān)基因lASS5抗體 規(guī)格 0.2ml
5-HT(Human 5-Hydroxytryptamine) ELISA Kit 人5羥色胺 96T
PAI1 英文名稱: 內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體 0.2ml
Cux2 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄同源蛋白質(zhì)CUX2抗體 0.1ml
Anti-Kiss-1 轉(zhuǎn)移抑制基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml