詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人外周淋巴細(xì)胞;U266B1培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系是由N.K. Nilsson于1970年從一名53歲患有骨髓瘤男性的外周血中分離建立的。免疫學(xué)研究表明,該細(xì)胞和體內(nèi)骨髓瘤細(xì)胞表達(dá)相同的免疫球蛋白。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C8
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
人外周淋巴細(xì)胞;U266B1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Human soluble protein 185,sp185/HER-2 ELISA Kit 人可溶性蛋白185Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-SLC16A3/MCT-4 MCT4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
TRAb ELISA Kit 大鼠抗促甲狀腺素受體抗體 96T
ASP4 英文名稱: 天冬酸蛋白酶ASP4抗體 0.2ml
BRN3B 英文名稱: 腦特定蛋白Brn3B抗體 0.1ml
Anti-SLC16A3/MCT-4 MCT4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VEGFR-3/Flt-4(Mouse Vascuoar endothelial cell growth factor receptor) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-PBK/TOPK (Thr9) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化PDZ連接激酶/T-LAK細(xì)胞源蛋白激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Goat IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格 0.1ml
PCDH1(Human Interleukin-2 receptor,IL-2R) ELISA Kit 人原鈣黏素1 96T
LDHC(Cancer,testis antigen 32) 英文名稱: 乳酸脫氫酶LDH-C(/抗原32)抗體 0.1ml
ARA24 英文名稱: 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 0.2ml
Anti-Phospho-PBK/TOPK (Thr9) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化PDZ連接激酶/T-LAK細(xì)胞源蛋白激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人同型半胱氨酸敏感內(nèi)質(zhì)網(wǎng)泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白成員1(HERP1) ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠骨成型蛋白2(BMP2)ELISA試劑盒,英文名:BMP2 ELISA KiISA Kit for Human Thiomorpholine-carboxylate dehydrogenase小鼠花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒,英文名:AA ELISA KiISA Kit for Human Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒,英文名:C3a ELISA KiISA Kit for Human C-reactive protein小鼠L-乳酸脫氫酶A鏈(LDH-A)ELISA試劑盒,英文名:LDH-A ELISA KiISA Kit for Human Cadherin-1小鼠白介素1受體拮抗劑(IL-1RA)ELISA試劑盒,英文名:IL-1RA ELISA KiISA Kit for Human Beta-defensin 1小鼠血紅蛋白(HB)ELISA試劑盒,英文名:HB ELISA KiISA Kit for Human Protein FAM151A小鼠嗜鉻蛋白B(CHGB)ELISA試劑盒,英文名:CHGB ELISA Kit
ELISA Kit for Human Heat shock protein HSP 90-alpha小鼠低密度脂蛋白受體銜接蛋白1(LDLRAP1)ELISA試劑盒,英文名:LDLRAP1 ELISA KiISA Kit for Human Phosphatidylinositol-glycan-specific phospholipase D小鼠膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FPN)ELISA試劑盒,英文名:FPN ELISA KiISA Kit for Human High mobility group protein B1小鼠海藻糖酶(TREH)ELISA試劑盒,英文名:TREH ELISA KiISA Kit for Human Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP5)ELISA試劑盒,英文名:MCP5 ELISA KiISA Kit for Human Interferon alpha/beta receptor 2小鼠UDP葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)ELISA試劑盒,英文名:UGCG ELISA KiISA Kit for Human KiSS-1 receptor小鼠1,25-二羥基維生素D3(DHVD3)ELISA試劑盒,英文名:DHVD3 ELISA KiISA Kit for Human Lipopolysaccharide-binding protein大鼠循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)ELISA試劑盒,英文名:CIC ELISA Kit
兔抗羊IgG-純化抗體 1mg/10mg 國產(chǎn)
CHI3L2 英文名稱: 軟骨細(xì)胞蛋白39抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Cortactin (Tyr466) 磷酸化皮層肌動蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human 膀胱抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DCAF13 英文名稱: DCAF13蛋白抗體 0.2ml
Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Guinea pig ovalbumin specific IgG,OVA sIgG ELISA Kit 豚鼠卵清蛋白特異性IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr142) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體 規(guī)格 0.2ml
2,4-D/BSA 2,4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血清白蛋白 1mg
Kv4.2 英文名稱: 電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh WDR79/TCAB1 端粒酶卡哈爾體蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr142) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml