詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱(chēng) 人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾);293T/17培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 293細(xì)胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱(chēng)為293T。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化5-15分鐘。1:4-1:8。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。
傳代情況 P(17+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾);293T/17培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀(guān)察 在倒置顯微鏡下觀(guān)察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀(guān)察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
Anti-FANCD2(phospho Ser222) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化FANCD2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Nebulin/FITC 熒光素標(biāo)記伴肌動(dòng)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C12ORF49 12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體 規(guī)格 0.2ml
PACAP/VIP receptor 腺苷酸環(huán)化酶激活肽/血管活性腸肽受體(抗原) 0.5mg
Centromeric histone H3-like protein-2 英文名稱(chēng): 組蛋白H3樣蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RNF24 環(huán)指蛋白24抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Nebulin/FITC 熒光素標(biāo)記伴肌動(dòng)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VC ELISA Kit 大鼠維生素CMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ABCG2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠ABCG2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FKSG14/Centromere protein K 著絲粒蛋白K 規(guī)格 0.2ml
MDC/CCL22(Human Macrophage-Derived Chemokine) ELISA kit 人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子 96T
phospho-MAP1LC3A(Ser12) 英文名稱(chēng): 磷酸化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體 0.1ml
ACTH (7-23) 英文名稱(chēng): 促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH (7-23)抗體 0.1ml
Anti-ABCG2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠ABCG2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人核糖核酸酶A2(RNASE2)ELISA試劑盒人96T6.25-400 U/mL大鼠脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5(FATP5)ELISA試劑盒,英文名:FATP5 ELISA Kit豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒,英文名:IL12B ELISA KiISA Kit for Human Adenosine receptor A1小鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒,英文名:Free-T3 ELISA Kit人載脂蛋白B(Apo-B)ELISA試劑盒人96T78-5000 ng/mL小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒,英文名:CT-1 ELISA KiISA Kit for Human Alpha-actinin-3小鼠生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒,英文名:GHRP ELISA Kitβ羥丁酸(beta-Hydroxybutyric acid)ELISA試劑盒通用96T0.156-10 umol/L小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒,英文名:NGB ELISA KiISA Kit for Chondroitin sulfate小鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒,英文名:MDC/CCL22 ELISA Kit
人胞裂蛋白5(SEPT5)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠尾加壓素2受體(UTS2R)ELISA試劑盒,英文名:UTS2R ELISA KiISA Kit for Human Chondroitin sulfate proteoglycan 4小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒,英文名:CA ELISA KiISA Kit for Human Carbohydrate Antigen 50小鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒,英文名:BACE1 ELISA KiISA Kit for Human C-X-C motif chemokine 3小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒,英文名:IGFBP-3 ELISA KiISA Kit for Human N(G), N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2小鼠粘蛋白1(MUC1)ELISA試劑盒,英文名:MUC1 ELISA KiISA Kit for Human Pro-epidermal growth factor小鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白2(MAP2)ELISA試劑盒,英文名:MAP2 ELISA KiISA Kit for Human Tissue factor小鼠輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)ELISA試劑盒,英文名:NEFL ELISA Kit
鼠兔通用SP(HRP)試劑盒 140片 進(jìn)口原料
Ubiquitin D 英文名稱(chēng): 泛素D抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATF2(Ser94) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 規(guī)格 0.1ml
N-ras 原癌基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DUSP13 英文名稱(chēng): 雙特異性磷酸酶13抗體 0.2ml
Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-HBME-1 /FITC 熒光素標(biāo)記間質(zhì)細(xì)胞HBME1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體 規(guī)格 0.2ml
5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4) 5-羥色胺受體4抗原 0.5mg
GRO Alpha 英文名稱(chēng): 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因-1抗體GROa 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml