EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KM0501培養(yǎng)

細胞名稱  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KM0501培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣

品牌 懸浮生長

特征特性 該細胞來源于一正常男性的外周血。2005年由中國科學院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS

傳代方法 1：

2傳代；5-6天一次  

傳代情況 P7

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 熒光法（-）　

STR Amelogenin：XY；D8S1179：14,16；D21S11：30,33.2；D7S820：11,12；CSF1PO：10；D3S1358：17；TH01：7， 9；D13S317：8，12；D16S539： 11，12；D2S1338：,17,20；D19S433：13,14；vWA：19；THOX：8；D18S51：14,15；D5S818：10,11 ；FGA：24。

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KM0501培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-ZW10 peptide/FITC 熒光素標記著絲粒蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

DCC (Deleted in colorectal cancer gene) 結(jié)直腸癌缺失基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

膜粘連蛋白 Ⅳ抗體 Anti-Annexin Ⅳ 0.1ml

ZBTB5 英文名稱： 鋅指蛋白ZBTB5抗體 0.2ml

Dact2 英文名稱： Dapper2蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ERK1+ERK2(Thr185+Tyr187+Thr202+Tyr204) 磷酸化原活化蛋白激酶ERK抗體 規(guī)格 0.1ml

DCC (Deleted in colorectal cancer gene) 結(jié)直腸癌缺失基因抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
u-T4 ELISA Kit 大鼠高敏甲狀腺素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-ULBP3/N2DL3 UL16結(jié)合蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GCET1 B淋巴細胞生發(fā)中心相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

CXCL16 ELISA Kit 大鼠CXC趨化因子配體16 96T

phospho-NFATc2(Ser330) 英文名稱： 磷酸化核因子活化T細胞胞漿蛋白2抗體 0.1ml

ADCY10 英文名稱： 腺苷酸環(huán)化酶10抗體 0.2ml

Anti-ULBP3/N2DL3 UL16結(jié)合蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
人二氫喋啶還原酶(DHPR)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒，英文名：Col Ⅰ ELISA KiISA Kit for Human Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒，英文名：gp130 ELISA Kit人粘蛋白2(MUC2)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒，英文名：PGF2α ELISA KiISA Kit for Human NADPH oxidase 1大鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒，英文名：Lptn/LTN/XCL1 ELISA Kit人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒，英文名：T4 ELISA KiISA Kit for Progesterone大鼠骨保護素(OPG)ELISA試劑盒，英文名：OPG ELISA Kit人增殖細胞核抗原相關(guān)因子(PCNA-associated factor)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠膽囊收素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒，英文名：CCK ELISA Kit

人鋅轉(zhuǎn)運蛋白3(ZnT-3)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠胰島素樣蛋白3(INSL3)ELISA試劑盒，英文名：INSL3 ELISA KiISA Kit for Human POU domain, class 5, transcription factor 1大鼠白介素26(IL-26)ELISA試劑盒，英文名：IL-26 ELISA Kit人血小板衍生生長因子C(PDGF)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL大鼠KiSS-1受體(KISS1R)ELISA試劑盒，英文名：KISS1R ELISA KiISA Kit for Human Regucalcin大鼠活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒，英文名：Activin-A ELISA Kit人絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SIK1(Serine/threonine-protein kinase SIK1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠乙醇脫氫酶1(ADH1)ELISA試劑盒，英文名：ADH1 ELISA KiISA Kit for Human Somatostatin receptor type 2大鼠戊糖素(PTD)ELISA試劑盒，英文名：PTD ELISA Kit人α突觸核蛋白(Alpha-synuclein)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL大鼠神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒，英文名：NKB ELISA Kit
山羊抗大鼠 IgM/HRP 0.1ml 美國Jackson公司分裝

VWF 英文名稱： 血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATG9A(Ser735) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體 規(guī)格 0.1ml

Nogo-B/A 軸索過度生長抑制因子-B/A抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Delta Opioid Receptor 英文名稱： D型受體抗體 0.1ml

anti-AQP1 水通道蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Human Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit 人補體片斷3aMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-RNF126 環(huán)指蛋白126抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GstP1/GST class-pi 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶pi基因抗體 規(guī)格 0.1ml

8-iso-PG(Mouse 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 小鼠8異前列腺素 96T

Oncomodulin 英文名稱： 癌調(diào)蛋白/癌鈣蛋白抗體 0.2ml

Bad 英文名稱： 相關(guān)死亡促進因子Bad抗體 0.1ml

Anti-RNF126 環(huán)指蛋白126抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml