詳細(xì)介紹
人腎腺癌細(xì)胞;ACHN價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 人腎腺癌細(xì)胞;ACHN價(jià)格
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 ACHN細(xì)胞系建系于1979年,衍生于一個(gè)患惡性腎癌的22歲男性白人病料。細(xì)胞系在MNM培養(yǎng)液中穩(wěn)定傳代150天,然后大量增殖接種裸鼠,4周后產(chǎn)生明顯的局部浸染性腫瘤。干擾素可抑制該細(xì)胞系增殖,因此,ACHN細(xì)胞可用于人干擾素和干擾素誘導(dǎo)劑的抗細(xì)胞增殖研究。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;1%NEAA
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C31
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Ubiquitin/FITC 熒光素標(biāo)記泛素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CCL26(Eotaxin 3) 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白3抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
磷酸化β-連環(huán)蛋白抗體 Anti-p-β catenin 0.1ml
Synaptogyrin 3 英文名稱: 神經(jīng)細(xì)胞囊泡循環(huán)蛋白3抗體 0.2ml
Estrogen Sulfotransferase 英文名稱: 雌激素轉(zhuǎn)移酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-HOMER3(Thr36) 磷酸化HOMER3蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
CCL26(Eotaxin 3) 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白3抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
sPECAM-1/sCD31 ELISA Kit 大鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AAT/FITC 熒光素標(biāo)記α-1抗胰蛋白酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FLT-3/CD135 FMS樣酪氨酸激酶3 規(guī)格 0.2ml
MCP-1/CCL2/MCAF(Human monocyte chemotactic protein 1/monocyte chemotactic and activating factor) ELISA kit 人單核細(xì)胞趨化蛋白1 96T
MC1 Receptor 英文名稱: 黑皮質(zhì)素-1受體抗體 0.1ml
Agrin 英文名稱: 聚集蛋白抗體 0.1ml
Anti-AAT/FITC 熒光素標(biāo)記α-1抗胰蛋白酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TTV(Human transfusion transmitted virus) ELISA Kit 人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒 96T
PSMD8 英文名稱: 蛋白酶調(diào)解因子8抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh KIFC1 驅(qū)動蛋白家族成員C1抗體 規(guī)格 0.2ml
FT4(Human Free Thyroxine) ELISA Kit 人游離甲狀腺素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C9orf75 英文名稱: 9號染色體開放閱讀框75抗體 0.2ml
Anti-Lysozyme 溶菌酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-GDNF/FITC 熒光素標(biāo)記膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-NT-3/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)營養(yǎng)因子-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BMP9 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體 規(guī)格 0.2ml
ANP(atrial natriuretic peptide) 心鈉肽(心鈉素)抗原 0.5mg
HECA 英文名稱: HECA蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RECQL5 RecQ解旋酶樣蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-NT-3/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)營養(yǎng)因子-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml