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詳細(xì)介紹
慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞；K-562價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞；K-562價格
形態(tài)特性 成淋巴細(xì)胞
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞適合做轉(zhuǎn)染宿主，來自于一位53歲女性慢性粒細(xì)胞白血病人的胸腔積液
培養(yǎng)條件 IMDM：
Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 PN5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR AMEL:X,X；CSF1PO:9,10；D12S391:23,23；D13S317:8,8；D16S539:11,12；D18S51:
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-P-HP1/FITC 熒光素標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體(果蠅)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-HAS(human serum albumin) 兔抗人血清白蛋白 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體 Anti-GLUT4 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/FITC FITC標(biāo)記的兔抗IgM 0.3ml
FAM101A 英文名稱： FAM101A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-SHC (Tyr427) 磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-HAS(human serum albumin) 兔抗人血清白蛋白 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
sFAS/Apo-1(Rat soluble Factor-related Apoptosis,sFAS/Apo-1 )ELISA Kit 大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-STEAP1 前列腺跨膜上皮1抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格 0.5ml
Hpt/HP ELISA Kit 大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白 96T
CDCA1 英文名稱： 細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
phospho-B-Raf (Ser446) 英文名稱： 磷酸化B-Raf抗體 0.1ml
Anti-STEAP1 前列腺跨膜上皮1抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
TR ELISA Kit 大鼠凝血酶受體 96T
OPA1 英文名稱： 視神經(jīng)相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh GPR30 G蛋白偶聯(lián)受體30抗體 規(guī)格 0.1ml
Human parathyroid hormone-like protein,PLP ELISA Kit 人甲狀旁腺激素樣蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
BCMA 英文名稱： B淋巴細(xì)胞成熟因子抗體 0.1ml
Anti-Sema7A/CD108 軸突生長因子CD108抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-BRMS-1/FITC 熒光素標(biāo)記癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-GRM2+GRM4/FITC 熒光素標(biāo)記促代謝型谷氨酸受體2+4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh CHRNA7 煙堿型乙酰膽堿受體α7抗體 規(guī)格 0.1ml
AQP4(aquaporin Protein-4) 水通道蛋白-4(抗原) 0.5mg
ADM2 英文名稱： 中介素抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh TNFSF15/TL1A 壞死因子配體超家族成員15抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-GRM2+GRM4/FITC 熒光素標(biāo)記促代謝型谷氨酸受體2+4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
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