詳細(xì)介紹
人腎透明細(xì)胞腺癌;786-0價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 人腎透明細(xì)胞腺癌;786-0價(jià)格
形態(tài)特性 上皮樣細(xì)胞
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一個(gè)原發(fā)性透明細(xì)胞癌。 此細(xì)胞有微絨毛和橋粒,能在軟瓊脂是生長(zhǎng)。 此細(xì)胞生成的一個(gè)PTH樣的多肽與乳癌和肺癌中的肽相似。 這個(gè)多肽的N端與PTH相似,活性與PTH相似,分子量為6000道爾頓
培養(yǎng)條件 RPMI 1640(含2mM L-glutamine) (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR Amel
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-RNF126/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)指蛋白126抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ADNP (NAP) (Activity-dependent Neuroprotective protein ) 活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
髓鞘堿性蛋白抗體 Anti-MBP 0.1ml
SULT2A1 英文名稱: 膽鹽磺基轉(zhuǎn)移酶 0.1ml
FAM50A 英文名稱: FAM50A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PIK3R1(Tyr467) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
ADNP (NAP) (Activity-dependent Neuroprotective protein ) 活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit 人可溶性CD38Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Measles virus fusion protein 麻疹病毒融合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
sEPCR(Human soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 96T
SORCS2 英文名稱: 液泡蛋白分選受體SORCS2抗體 0.2ml
CTAGE4 英文名稱: 皮膚T細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體 0.2ml
Anti-Measles virus fusion protein 麻疹病毒融合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha) 人壞死因子-α(多肽抗原) 0.5mg
High density lipoprotein 英文名稱: 高密度脂蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh C1orf52 1號(hào)染色體開放閱讀框52抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-EphA2 R/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠酪氨酸蛋白激酶受體A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh RSV 呼吸道合胞病毒抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-MSK1/FITC 熒光素標(biāo)記有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
AFP-L1(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1) ELISA Kit 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-HDAC7 (Ser318) 磷酸化組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MK5/MAP2K5 原活化蛋白激酶激酶5抗體 規(guī)格 0.1ml
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit 人天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶 96T
RNF45 英文名稱: 環(huán)指蛋白45/自分泌運(yùn)動(dòng)因子受體抗體 0.2ml
C1orf216 英文名稱: 1號(hào)染色體開放閱讀框216抗體 0.2ml
Anti-phospho-HDAC7 (Ser318) 磷酸化組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml