詳細介紹
人腎透明細胞腺癌;786-0價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 人腎透明細胞腺癌;786-0價格
形態(tài)特性 上皮樣細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一個原發(fā)性透明細胞癌。 此細胞有微絨毛和橋粒,能在軟瓊脂是生長。 此細胞生成的一個PTH樣的多肽與乳癌和肺癌中的肽相似。 這個多肽的N端與PTH相似,活性與PTH相似,分子量為6000道爾頓
培養(yǎng)條件 RPMI 1640(含2mM L-glutamine) (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR Amel
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-RNF126/FITC 熒光素標記環(huán)指蛋白126抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ADNP (NAP) (Activity-dependent Neuroprotective protein ) 活性依賴的神經(jīng)保護肽(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
髓鞘堿性蛋白抗體 Anti-MBP 0.1ml
SULT2A1 英文名稱: 膽鹽磺基轉(zhuǎn)移酶 0.1ml
FAM50A 英文名稱: FAM50A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PIK3R1(Tyr467) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
ADNP (NAP) (Activity-dependent Neuroprotective protein ) 活性依賴的神經(jīng)保護肽(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit 人可溶性CD38Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Measles virus fusion protein 麻疹病毒融合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Cy5 Cy5標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
sEPCR(Human soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 人可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體 96T
SORCS2 英文名稱: 液泡蛋白分選受體SORCS2抗體 0.2ml
CTAGE4 英文名稱: 皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體 0.2ml
Anti-Measles virus fusion protein 麻疹病毒融合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha) 人壞死因子-α(多肽抗原) 0.5mg
High density lipoprotein 英文名稱: 高密度脂蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh C1orf52 1號染色體開放閱讀框52抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-EphA2 R/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠酪氨酸蛋白激酶受體A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh RSV 呼吸道合胞病毒抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-MSK1/FITC 熒光素標記有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
AFP-L1(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1) ELISA Kit 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-HDAC7 (Ser318) 磷酸化組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MK5/MAP2K5 原活化蛋白激酶激酶5抗體 規(guī)格 0.1ml
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit 人天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶 96T
RNF45 英文名稱: 環(huán)指蛋白45/自分泌運動因子受體抗體 0.2ml
C1orf216 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框216抗體 0.2ml
Anti-phospho-HDAC7 (Ser318) 磷酸化組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml