詳細介紹
小鼠腦瘤細胞;BC3H1價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 小鼠腦瘤細胞;BC3H1價格
形態(tài)特性 多角
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞來源于小鼠平滑肌樣腫瘤組織;可產(chǎn)生腺苷酸磷酸激酶和肌酸磷酸激酶;表達乙酰膽堿受體和H-2K,類似骨骼肌細胞分化停滯的狀態(tài),而非平滑肌細胞;鼠痘病毒陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
傳代方法 1:2~1:10傳代;每周換液2次。
傳代情況 P18
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Reprimo/Rprm/FITC 熒光素標記細胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
GRGDS peptide 粘附多肽GRGDSMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg
Lpin1 抗體 Anti-Lpin1 protein 0.1ml
SH2D1A 英文名稱: 信號傳導(dǎo)T淋巴細胞活化相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
FAM82A1 英文名稱: 微管動力調(diào)節(jié)蛋白FAM82A抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PKMYT1(Thr495) 磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
GRGDS peptide 粘附多肽GRGDSMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg
SAA (Rabbit Serum amyloid A) ELISA Kit 兔血清淀粉樣蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-CXC-R2/FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DBX1 腦發(fā)育同源蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse IgM/PE 熒光素PE標記小鼠IgM 0.1ml
LRFN1 英文名稱: 神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh β-Amyloid(1-42) β淀粉樣肽(1-42)抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-CXC-R2/FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TMB-2HC3,3′,5,5′tetramethylbenzidine,TMB TMB 2HCl 3,3’5,5’-四甲基聯(lián)苯胺二鹽酸 250mg
TGM3 英文名稱: 谷酰胺轉(zhuǎn)胺酶3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh NS5ATP9/KIAA0101 丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體 規(guī)格 0.2ml
P-Cadherin 人P-鈣粘附蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C9orf103 英文名稱: 9號染色體開放閱讀框103抗體 0.2ml
Anti-Phospho-Cytokeratin 17 (Ser44) 磷酸化細胞角蛋白17抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
HSP-27(Human heat shock protein 27) ELISA Kit 人熱休克蛋白27Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-P73 protein P73抑制基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HSD17B1 羥類固醇脫氫酶17β-HSD抗體 規(guī)格 0.1ml
ATG(Human anti-thymocyte globulin) ELISA Kit 人抗胸腺細胞球蛋白 96T
PDCD2L 英文名稱: 程序性細胞死亡2樣抗體 0.2ml
CKAP1 英文名稱: 細胞骨架相關(guān)蛋白1/微管蛋白折疊輔助因子B抗體 0.2ml
Anti-P73 protein P73抑制基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml