詳細介紹
雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3價格
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 可產(chǎn)生單克隆抗體;凍存前做支原體去除
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 保持細胞密度在1×105~1×106 cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-RhoA /FITC 熒光素標記RhoA抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TP-5(Thymopentin) 胸腺五肽Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
原活化蛋白激酶激酶1 Anti-MAPKK1 0.1ml
Phospho-SHP2 (Tyr81) 英文名稱: 磷酸化蛋白酪酸磷酸酶2抗體 0.1ml
FBRSL1 英文名稱: 乙型肝炎病毒X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PIM1(Tyr218) 磷酸化前病毒整合位點蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
TP-5(Thymopentin) 胸腺五肽Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Renin(Mouse Renin) ELISA Kit 小鼠腎素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CENPA /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠著絲粒蛋白A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的驢抗羊IgG 規(guī)格 0.1ml
Guinea pig interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 豚鼠白介素4 96T
LC3C 英文名稱: 微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體 0.2ml
ARHGEF18 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18抗體 0.2ml
Anti-CENPA /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠著絲粒蛋白A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Thymopentin 胸腺五肽 0.5mg
Prostate Specific Antigen 英文名稱: 激肽釋放酶3/舒血管素3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh CXCL9/MIG γ干擾素誘導(dǎo)單核細胞因子抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-HSP27 (Ser82)/FITC 熒光素標記磷酸化熱休克蛋白27抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh WASF1/WAVE 1 WAVE1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-DRADA/ADAR1/FITC 熒光素標記雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-KGFR/FGFR2/FITC 熒光素標記角質(zhì)形成細胞生長因子受體/成纖維細胞生長因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-NF-M/FITC 熒光素標記中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C10orf140 10號染色體開放閱讀框140抗體 規(guī)格 0.2ml
Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相關(guān)死亡促進因子Bad抗原 0.5mg
Hepatitis C Virus NS5a 英文名稱: 丙型肝炎病毒NS5A抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RNF14 環(huán)指蛋白14抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-NF-M/FITC 熒光素標記中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml