詳細介紹
小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/3T3cloneA31價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/3T3cloneA31價格
形態(tài)特性 成纖維細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 Contact-inhibited semi-normal cell line
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:
2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Ret MMP-9 大鼠血清金屬基質(zhì)蛋白酶-9Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-EAAT3 膠質(zhì)細胞谷氨酸運載蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NADE/NGFRAP1 神經(jīng)生長因子受體相關蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
T-TM(Human thrombinthrombomodulin compound) ELISA Kit 人凝血酶血栓調(diào)節(jié)蛋白復合物 96T
FHOD3 英文名稱: FHOD3蛋白抗體 0.2ml
CCR6 英文名稱: 細胞表面趨化因子受體6抗體 0.1ml
Anti-EAAT3 膠質(zhì)細胞谷氨酸運載蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
PRM1(Human Protamine 1) ELISA Kit 人魚精蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD63/MLA1 黑色素瘤相關抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HBV pre S1/S2 protein 人乙肝病毒pre S1/S2蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
PAP ELISA Kit 大鼠前列腺酸性磷酸酶 96T
PAX7 英文名稱: 配對盒基因7抗體 0.1ml
Biliverdin Reductase 英文名稱: 膽綠素還原酶抗體 0.2ml
Anti-CD63/MLA1 黑色素瘤相關抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
T(Mouse Testoterone)ELISA Kit 小鼠睪酮 96T
phospho-PTPN6(Tyr564) 英文名稱: 磷酸化蛋白酪酸磷酸酶1C抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh HSPBAP1 熱休克蛋白27相關蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit 人類風濕因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CCDC148 英文名稱: 卷曲螺旋結構域蛋白148抗體 0.2ml
Anti-Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
VEGF-D ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子DMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Apaf-1/FITC 熒光素標記凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAM78A/C9orf59 9號染色體開放閱讀框抗體 規(guī)格 0.2ml
bFGF(Human basic fibroblast growth factor) ELISA Kit 人堿性成纖維細胞生長因子 96T
MMP9 英文名稱: 基質(zhì)金屬蛋白酶9抗體 0.1ml
ACOX2 英文名稱: 過氧化物酶?;o酶A氧化酶2抗體 0.2ml
Anti-Apaf-1/FITC 熒光素標記凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml