小鼠骨肉瘤成骨細胞；K7M2wtK7M2-WT培養(yǎng)

細胞名稱  小鼠骨肉瘤成骨細胞；K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)
形態(tài)特性

品牌 貼壁生長　

特征特性 抗原表達: CD31 陽性 [PubMed:1315100] 產(chǎn)物: 八因子 [PubMed: 11315100]; 整合唾液酸蛋白 (BSP) [PubMed11315100]; biglyan [PubMed: 11315100]; decorrin [PubMed:1315100]; villin 2 (ezrin) [PubMed: 11325848]. 骨唾液酸蛋白, biglyan, decorrin, 和 osteopontin 的表達顯示其骨家族細胞特
小鼠骨肉瘤成骨細胞；K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
小鼠骨肉瘤成骨細胞；K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-PARP/FITC 熒光素標記多腺苷二磷酸多聚酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Goat Anti-human IgA/FITC 熒光素標記羊抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

人巨細胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體 Anti-anti-HCMV PP65/HHV5 PP65 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml

FMNL1 英文名稱： 成蛋白相關蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1418) 磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgA/FITC 熒光素標記羊抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
Plant Vitamin A,VA ELISA Kit 植物維生素AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-DMBT1 /FITC 熒光素標記抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Cyclin B3 周期素B3抗體 規(guī)格 0.2ml

BSA/Cy5 熒光素Cy5標記血清白蛋白 0.1ml

KCNH1 英文名稱： 鉀離子通道蛋白EAG1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh WISP39/FKBPL p21調(diào)控蛋白WISP39抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-DMBT1 /FITC 熒光素標記抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Styk1 英文名稱： 絲酸/蘇酸/酪酸激酶STYK1抗體 0.2ml

Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167) 英文名稱： 磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體 0.1ml

src原癌基因抗體 Anti-SRC 0.2ml

Anti-Tie2/FITC 熒光素標記上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAP4(Ser1046) 磷酸化微管相關蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml

ATF6(activating transcription factor 6) 活化轉(zhuǎn)錄因子6抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠骨肉瘤成骨細胞；K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)IL-1 Beta (Rabbit Interleukin 1 Beta) ELISA Kit 兔白介素1βMulti-class antibodies規(guī)格： 96T

Anti-CXCL5/ENA-78/FITC 熒光素標記上皮中性粒細胞活化肽78抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DcR1 壞死因子配體超家族成員10C 規(guī)格 0.1ml

Bovine IgG/APC 熒光素APC標記IgG 0.1ml

Leptin 英文名稱： 瘦素抗體 0.1ml

沙丁胺醇單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

Anti-CXCL5/ENA-78/FITC 熒光素標記上皮中性粒細胞活化肽78抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
小鼠骨肉瘤成骨細胞；K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。