小鼠胚胎成纖維細胞；STO培養(yǎng)

細胞名稱  小鼠胚胎成纖維細胞；STO培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細胞樣　

品牌 貼壁生長

特征特性 STO是一株繼代生長的胚成纖維細胞系，可用于制備飼養(yǎng)層細胞（feeder layers）和其他研究。

培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：

Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS  

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C4

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 陰性　

STR

同工酶 同工酶鑒定

染色體

使用權限
小鼠胚胎成纖維細胞；STO培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-phospho-PAK1(pSer)/FITC 熒光素標記抗磷酸化p21激活激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Streptavidin/Gold 金標記鏈霉親和素(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

FOSL2抗體 Anti-FOSL2 0.1ml

Goat Anti-rabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的羊抗兔IgG 0.1ml

FN3K 英文名稱： 果糖胺-3激酶抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Stat4 (Tyr693) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子4抗體 規(guī)格 0.1ml

Streptavidin/Gold 金標記鏈霉親和素(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
Plant Human Vitamin C,VC ELISA Kit 植物維生素CMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-DOK 2/p56Dok2/FITC 熒光素標記抗人、大、小鼠D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CXX1/Cerebral protein 5 腦蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml

Newcastle disease virus/HRP 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒)偶聯(lián)辣根過氧化物酶 1ml

KT3 tag 英文名稱： KT3 tag抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh WIF1 Wnt信號抑制因子1抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-DOK 2/p56Dok2/FITC 熒光素標記抗人、大、小鼠D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Streptokinase 英文名稱： 鏈激酶抗體 0.1ml

eIF3K 英文名稱： 真核翻譯起始因子3K抗體 0.2ml

激素受體相關蛋白16抗體 Anti-TRA16 0.2ml

Anti-TRA16/FITC 熒光素標記激素受體相關蛋白16抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ITGB4(Tyr1526) 磷酸化整合素β4抗體 規(guī)格 0.1ml

PR (Progestogerone receptor) 孕激素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
CA724(Mouse CA724) ELISA Kit 小鼠標志物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CK10/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記細胞角蛋白10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DNase II 脫氧核糖核酸酶2抗體 規(guī)格 0.2ml

Bovine IgG/RBITC 羅丹明標記IgG 0.3ml

LETMD1 英文名稱： 原癌基因2抗體 0.2ml

黃素總量檢測試劑盒 96孔/盒 糧食作物(玉米、大米、豆類、花生、麥類等)、飼料、面粉等

Anti-CK10/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記細胞角蛋白10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。