詳細介紹
小鼠肝癌細胞;H22價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 小鼠肝癌細胞;H22價格
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞系分離自小鼠腹水,由大連醫(yī)科學院建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C15
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權限 A類
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-phospho APP(pThr668)/FITC 熒光素標記抗磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/Gold 金標記兔抗大鼠IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
凋亡調節(jié)基因之一抗體 Anti-FLIP S/L 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
FNIP2 英文名稱: 卵泡刺激素結合蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-STAT5a(Tyr694) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子5a抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/Gold 金標記兔抗大鼠IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
PL/Fbn(Human plasmin/fibrinolysin) ELISA Kit 人纖溶酶/纖維蛋白溶酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PSAP/PAP (human) 前列腺酸性磷酸酶抗體(人)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HCMV UL49 人巨細胞病毒UL49蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Alpha-Gal(Mouse Alpha-galactoyl) ELISA Kit 小鼠α半乳糖基抗原 96T
PEPT1 英文名稱: 腸道肽轉運蛋白1/小肽轉運蛋白1抗體 0.1ml
BPY2 英文名稱: 特異性堿性蛋白Y2抗體 0.2ml
Anti-PSAP/PAP (human) 前列腺酸性磷酸酶抗體(人)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Streptavidin/Cy5 熒光素Cy5標記鏈霉親和素 0.1ml
Kinesin 英文名稱: 驅動蛋白KNS1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh CXCL10 CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti- Beta-Amyloid 1-42 CT(A Beta1-42)/FITC 熒光素標記β淀粉樣肽1-42 (C端抗體)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh VPS4a 液泡分選蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-FLAG Tag(CT)/FITC 熒光素標記FLAG Tag標簽抗體(C端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TS(Human thymidylate synthetase) ELISA Kit 人胸苷酸合成酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NAIF1 protein 核凋亡誘導因子蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-7 白介素7抗體 規(guī)格 0.1ml
BPI-Ab(Human anti-Bactericidal permeability increasing protein antibody) ELISA Kit 人抗殺菌通透性蛋白抗體 96T
PLGF 英文名稱: 胎盤生長因子抗體 0.1ml
phospho-c-Jun(Ser243) 英文名稱: 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
Anti-NAIF1 protein 核凋亡誘導因子蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml