小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u培養(yǎng)

小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u培養(yǎng)只能用于科研，不得用于臨床。應(yīng)用公司細(xì)胞庫細(xì)胞株種類齊全：大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株。細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿，光澤度好，*，專業(yè)技術(shù)指導(dǎo)。歡迎廣大科研用戶！

細(xì)胞名稱  小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣

品牌 半貼壁生長

特征特性 細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS　

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C5

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè) 陰性　

STR

同工酶 同工酶鑒定

染色體

使用權(quán)限 A類

小鼠雜交瘤細(xì)胞；D47-u培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-phospho-ERK1(Thr197/Thr202) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit Anti-Goat IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗羊IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml

成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體 Anti-FGFR3 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

FOXD2 英文名稱： 叉頭蛋白D2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin (Ser16) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-Goat IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗羊IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml
PINP 人I型前膠原肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NTCP/SLC10A1 鈉離子/磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 規(guī)格 0.1ml

T4 Polynucleotide Kinase T4 DNA 激酶 1000 ul(1000次反應(yīng))

TIMP-1(NT) 英文名稱： 金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體(N端) 0.1ml

C8orf86 英文名稱： 8號(hào)染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml

Anti-phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

STK31 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶31抗體 0.2ml

phospho-Erk1 (Thr202 + Tyr204) 英文名稱： 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體 0.1ml

超氧化物歧化酶2抗體 Anti-SOD2 0.2ml

Anti-TGF- Alpha /FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長因子–α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAPK8/MAPK9( Thr183+Tyr185) 磷酸化氨基末端激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml

NGF-R(p75NTR) 神經(jīng)生長因子受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-Histone H1b/FITC 熒光素標(biāo)記抗組蛋白H1b抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ATP7A 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)α鏈抗體 規(guī)格 0.1ml

BSA(標(biāo)準(zhǔn)) 血清白蛋白(標(biāo)準(zhǔn)) 1mg

GMPR2 英文名稱： 鳥苷酸還原酶2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml

Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml