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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；2A3培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長(zhǎng)
特征特性 可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C20
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠雜交瘤細(xì)胞；2A3培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-MMP-3/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-TRPM2 /FITC 熒光素標(biāo)記瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白抗體(M亞家族)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABC2/C17orf71 癌增強(qiáng)蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml
GPR18 英文名稱： G蛋白偶聯(lián)受體18抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh R Cadherin R Cadherin/CDH4 規(guī)格 0.2ml
Anti-TRPM2 /FITC 熒光素標(biāo)記瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白抗體(M亞家族)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
MEC/CCL28(Human mucosae associated epithelia chemokine) ELISA Kit 人粘膜相關(guān)上皮趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/APC APC標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
HSP-20(Human Heat Shock Protein 20) ELISA Kit 人熱休克蛋白20 96T
RTP4 英文名稱： 受體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體 0.2ml
Phospho-cdc25A (Ser178) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 0.1ml
Anti-GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rat Cyclic AMP response element binding protein,CREB ELISA Kit 大鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白 96T
TERT 英文名稱： 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Nkx2.5/Cardiac-specific homeobox 1 心臟特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5抗體 規(guī)格 0.2ml
RANTES 人趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
CEP164 英文名稱： 中心體蛋白CEP128抗體 0.1ml
Anti-CREB-1 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
TGM2(human transglutaminase 2C polypeptide) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2C多肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-HRH4/GPCR105 組織胺H4受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Matriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗體 規(guī)格 0.1ml
DAO(Human diamine oxidase) ELISA Kit 人二胺氧化酶 96T
RARRES1 英文名稱： 視黃酸受體應(yīng)答蛋白1抗體 0.1ml
COX7A2 英文名稱： 細(xì)胞色素c氧化酶7A2抗體 0.1ml
Anti-HRH4/GPCR105 組織胺H4受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
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