詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 皰疹病毒單抗雜交瘤細(xì)胞;C5Mcab培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 可產(chǎn)生抗皰疹病毒的單克隆抗體。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C50
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
皰疹病毒單抗雜交瘤細(xì)胞;C5Mcab培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Phospho-MK1/2 (Ser217/221)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TM/FITC 熒光素標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Acetyl-Histone H3(K9) 乙?;M蛋白H3抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml
GPR26 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體26抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Biotin/APC APC標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-TM/FITC 熒光素標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MDC/CCL22 人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CYP1A1 細(xì)胞色素P450 1A1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NFATc1/NFAT2 活化T細(xì)胞核因子1蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
human MAX dimerization protein 1,mxd1 ELISA Kit 人MAX二聚化蛋白1 96T
Thrombomodulin 英文名稱: 凝血調(diào)節(jié)蛋白/血栓調(diào)節(jié)素抗體 0.1ml
CLIC2 英文名稱: 氯離子通道蛋白2抗體 0.1ml
Anti-CYP1A1 細(xì)胞色素P450 1A1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
RANTES/CCL5(Human regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted) ELISA kit 人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子 96T
Phospho-MARCKS (Ser162) 英文名稱: 磷酸化丙酸蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh FGF21 成纖維細(xì)胞生長因子21抗體 規(guī)格 0.1ml
IgM ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白MMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
phospho-AKT (Ser473) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶B抗體 0.1ml
Anti-ADAM-TS1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
UBC(Human urinary bladder cancer antigen) ELISA Kit 人膀胱癌抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HDAC12 組蛋白去乙?;?2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Megsin 絲氨酸蛋白酶抑制劑B7抗體 規(guī)格 0.2ml
DBH(Human dopamine- Beta-hydroxylase) ELISA Kit 人多巴胺-β羥化酶 96T
RDH11 英文名稱: 視黃醇脫氫酶11/丙型肝炎病毒核心蛋白抗體 0.2ml
C1orf189 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框189抗體 0.2ml
Anti-HDAC12 組蛋白去乙?;?2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml