人成骨細胞組織處理緩沖液

產(chǎn)品名稱：人成骨細胞組織處理緩沖液
規(guī)格：100ml
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-phospho-Syndecan 4/FITC 熒光素標記抗磷酸化多配體聚糖4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-RIP2 (Ser176) /FITC 熒光素標記磷酸化受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ALT1 谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

GPRC5C 英文名稱： G蛋白偶聯(lián)受體GPRC5C蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Guinea pig IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格 0.3ml

Anti-Phospho-RIP2 (Ser176) /FITC 熒光素標記磷酸化受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
MAPKK1 (MAP kinase kinase 1) 原活化蛋白激酶激酶1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

人成骨細胞組織處理緩沖液Anti-Amphiphysin 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-BRCA1(Ser1423) 磷酸化癌易感基因1抗體 規(guī)格 0.1ml

Tris緩沖液 50ml 10mM pH 10.0

Phospho-VASP(Ser157) 英文名稱： 磷酸化血管擴張刺激磷蛋白抗體 0.1ml

DBF4B 英文名稱： S期激酶活化蛋白DBF4B抗體 0.2ml

Anti-Amphiphysin 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗大鼠IgM 0.1ml

GADD34 英文名稱： 生長抑制DNA損傷基因34抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh APOC4/Apolipoprotein CIV 載脂蛋白C4抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-IL-6/FITC 熒光素標記白介素6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-PSAP/PAP/FITC 熒光素標記前列腺酸性磷酸酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 成纖維細胞生長因子-8/纖維母細胞生長因子-8 (抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) 磷酸化原癌基因c-kit抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PASK/STK39 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶39抗體 規(guī)格 0.2ml

DLL4 Kit Human 人 DLL4 ELISA配對抗體 ELISA

TLE4 英文名稱： B淋巴細胞基因1抗體 0.2ml

CK2 英文名稱： 細胞角蛋白2抗體 0.1ml

Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) 磷酸化原癌基因c-kit抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。