詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:人成骨細(xì)胞試劑盒
規(guī)格:6次/盒
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-IL-17/PE 熒光素PE標(biāo)記白介素-17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Raptor /FITC 熒光素標(biāo)記mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Apelin/Apelin 13 脂肪炎癥因子Apelin抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
GPRIN1 英文名稱: G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Raptor /FITC 熒光素標(biāo)記mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MAPK4(Mitogen-activated protein kinase 4) 原活化蛋白激酶4抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
軸蛋白1Axin protein 1抗體 Anti-Axin1 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Tyr1068) 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml
B27添加劑 (原裝) 10ml Gibco
ZNF750 英文名稱: 鋅指蛋白750抗體 0.2ml
DTNBP1 英文名稱: 精神分裂癥易感基因抗體 0.1ml
軸蛋白1Axin protein 1抗體 Anti-Axin1 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/APC APC標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml
VP3 Goose parvovirus 英文名稱: 鵝細(xì)小病毒GPV抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh APM2 脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-12/FITC 熒光素標(biāo)記抗白介素12抗體(人)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human sIgA/FITC FITC標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 100ug
Anti-PTEN/MMAC1 /FITC 熒光素標(biāo)記一種抑制基因抗體(C端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Melamine/Gold 膠體金離子標(biāo)記三聚氰胺單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化氨基末端激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Aurora B/STK-1 有絲分裂激酶B抗體 規(guī)格 0.1ml
DLX4 (Dsital-less homebox4 isoformAlpha/ Beta) 末梢同源匡基因多肽片段 0.5mg
人成骨細(xì)胞試劑盒GPR48 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體48抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-mouse Kappa light chain/FITC FITC標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化氨基末端激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml