詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:人骨髓單核細(xì)胞組織處理緩沖液
規(guī)格:100ml操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-HAVCR1/KIM1/TIM1/FITC 熒光素標(biāo)記甲型肝炎病毒細(xì)胞受體1IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Tubb3/FITC 熒光素標(biāo)記β微管蛋白-Ⅲ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh 5-HTR2B 5-羥色胺受體2B抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
GRAF1 英文名稱: Rho GTP酶激活蛋白26抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh PTK9/TWF1 蛋白酪氨酸激酶9抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Tubb3/FITC 熒光素標(biāo)記β微管蛋白-Ⅲ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MAG Ab(Human anti-myelin associated glycoprotein antibody) ELISA Kit 人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-IKK beta KB抑制蛋白激酶β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAGED1 黑色素瘤相關(guān)抗原D1抗體 規(guī)格 0.2ml
OxLDL(Human oxidized lowdensity lipoprotein) ELISA Kit 人氧化低密度脂蛋白 96T
RCCD1 英文名稱: RCCD1蛋白抗體 0.1ml
CXCR4 英文名稱: 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗體 0.1ml
Anti-IKK beta KB抑制蛋白激酶β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
GIMAP3 英文名稱: GTP酶IMAP家族成員3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh APC/Adenomatous Polyposis Coli 腺瘤樣息肉抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-IL-17C/FITC 熒光素標(biāo)記白介素-17C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/FITC FITC標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.3ml
Anti-RAM-11/FITC 熒光素標(biāo)記抗RAM-11抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
FAK(Human focal adhesion kinase) ELISA Kit 人黏著斑激酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NPY1R 神經(jīng)肽Y1受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IGSF11 大腦和特異性免疫球蛋白超家族成員11抗體 規(guī)格 0.2ml
DNP-Ab(Human deoxyribonucleic protein antibody) ELISA Kit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體 96T
人骨髓單核細(xì)胞組織處理緩沖液PON1 英文名稱: 芳香酯酶1(對氧磷酶)抗體 0.1ml
CCR8 英文名稱: 細(xì)胞表面趨化因子受體8抗體 0.1ml
Anti-NPY1R 神經(jīng)肽Y1受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml