正常大鼠腎細胞；NRK-52E培養(yǎng)

細胞名稱  正常大鼠腎細胞；NRK-52E培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞

品牌 貼壁生長

特征特性

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質胎牛血清，5%  

傳代方法 消化3-5分鐘。1：

2。3天內可長滿。  

傳代情況 P(16+5)

凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測 陰性　

STR

同工酶

染色體

使用權限 A類
正常大鼠腎細胞；NRK-52E培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti- Alpha-MSH/POMC /FITC 熒光素標記α黑素細胞刺激素/阿黑皮素原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh 14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon) 14-3-3蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml

GRIK3 英文名稱： 谷酸受體紅藻酸離子3/谷酸受體7抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh PSMD10/Proteasome 26S S10 蛋白酶調解因子10抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Lumbrokinase 蚯蚓纖溶酶(蚓激酶抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-SLAMF9 CD2F-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子抗體 規(guī)格 0.1ml

CST7 Kit Human 人 Cystatin F / CST7 ELISA配對抗體 ELISA

Thymidylate synthase 英文名稱： 胸苷酸合成酶抗體 0.1ml

Cadherin 8 英文名稱： 鈣粘附蛋白8抗體 0.2ml

Anti-SLAMF9 CD2F-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/Gold 膠體金標記的兔抗豬IgG 0.5ml

phospho-FANCD2(Ser1404) 英文名稱： 磷酸化FANCD2抗體 0.1ml

鼠抗人C-反應蛋白單克隆抗體 Anti-C-CRP 0.2ml

Anti-phospho-P53 (Ser46) /FITC 熒光素標記磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-β catenin(Tyr142) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-bov IgG/Biotin 生物素化兔抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Anti-phospho-PKC delta (Tyr52)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Donkey Anti-Goat IgG 驢抗羊IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg

鼠抗人乙型肝炎表面抗原抗體 Anti-HRCAg/HBV 0.1ml

Dog IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml

FGFR1OP 英文名稱： FGFR1癌基因伴侶蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-RSK2(Ser369) 磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體 規(guī)格 0.1ml

Donkey Anti-Goat IgG 驢抗羊IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。