詳細(xì)介紹
大鼠雪旺細(xì)胞;RSC96價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 大鼠雪旺細(xì)胞;RSC96價格
形態(tài)特性 神經(jīng)元
品牌 貼壁生長
特征特性 RSC96細(xì)胞株是原代培養(yǎng)的大鼠雪旺細(xì)胞經(jīng)長時間培養(yǎng)后自發(fā)轉(zhuǎn)化而成的[PubMed:
9766530]。 2002年十二月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。 其后代通過BM 細(xì)胞周期蛋白處理21天消除支原體。 處理后六周,用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測試進(jìn)行支原體檢測。 結(jié)果都呈陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎?
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-NeuN/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)元核抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
淀粉樣肽前體蛋白抗體 Anti-APP695/770 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml
GRIM19 英文名稱: 干擾素/維誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Prkg1/cGKI cGMP依賴性蛋白激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
LTE4 ELISA Kit 大鼠白三烯E4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TGM3 轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GNAI3 抑制型G蛋白α3抗體 規(guī)格 0.2ml
HO-2(Mouse heme oxygenase 2) ELISA Kit 小鼠血紅素氧合酶2 96T
NMDAR2C 英文名稱: 谷酸受體2C抗體 0.1ml
ANKRD32 英文名稱: 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體 0.2ml
Anti-TGM3 轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
GDF9 英文名稱: 生長分化因子9抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh APOH 載脂蛋白H抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-IL-4/FITC 熒光素標(biāo)記白介素4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Proteasome 20S LMP2 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠低分子質(zhì)量蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
PRL (Rabbit prolactin) ELISA Kit 兔子催乳素Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-Phospho-Cyclin B1 (Ser133) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素B1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DARC/CD234 Duffy血型趨化因子受體抗體 規(guī)格 0.2ml
dog IgM/PE 熒光素PE標(biāo)記狗IgM 0.1ml
LTB4-R1/BLTR 英文名稱: 白三烯B4受體1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ZSWIM3 ZSWIM3蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-Cyclin B1 (Ser133) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素B1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml