犬腎細胞系/IgR；MDCK/IgR培養(yǎng)

細胞名稱  犬腎細胞系/IgR；MDCK/IgR培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞樣

品牌 貼壁生長

特征特性 該細胞為MDCK細胞的克隆系。

培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：

Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS  

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C6

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 陰性

STR

同工酶 同工酶鑒定

染色體

使用權限 A類
犬腎細胞系/IgR；MDCK/IgR培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-EGFL7/FITC 熒光素標記抗脈管發(fā)育(組裝)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-MMP-26/FITC 熒光素標記基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C21orf58 21號染色體開放閱讀框58抗體 規(guī)格 0.2ml

Tubulin- Beta 微管蛋白(抗原) 0.5mg

H9N1 Hemagglutinin 英文名稱： A型流感病毒H9N1血凝素型抗體 1ml

Rhesus antibody Rh S100B/S100 beta S100B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-MMP-26/FITC 熒光素標記基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Lgr5/GPR49 腸上皮干細胞蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-CaMKII (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 規(guī)格 0.1ml

Avidin阻擋劑 10ml Sigma原料

VANGL2 英文名稱： 神經(jīng)管畸形相關蛋白VANGL2抗體 0.2ml

DMAP1 英文名稱： DNA甲基轉移酶相關蛋白1抗體 0.2ml

Anti-AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗小鼠IgG 0.1ml

G protein alpha S 英文名稱： G蛋白αS抗體(鳥嘌呤核苷酸結合蛋白Gα s) 0.2ml

Rhesus antibody Rh ANKRD53 錨蛋白重復域53抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Insulin/FITC 熒光素標記標記胰島素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格 0.1ml

Anti-RUNX1/AML1/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠急性髓細胞白血病1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-TRT/FITC 熒光素標記端粒酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ASB12 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體 規(guī)格 0.2ml

Donkey Anti-rabbit IgG/Gold 膠體金標記的驢抗兔IgG 0.5ml

GJC1 英文名稱： 間隙連結蛋白31.9抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗猴IgM 規(guī)格 0.1ml

Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml