谷胱甘肽S轉移酶（GST）紫外分光光度法

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。

商品屬性：

商品介紹：

公司產品僅用于科研測定意義
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質家族，主要存在于細胞質內。GST是體內解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意，GST催化的反應減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。

測定原理：

GST催化GSH與CDNB結合，其結合產物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。

需自備的儀器和用品：

紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節(jié)移液器、1ml石英比色皿、雙蒸水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

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