乳酸脫氫酶（LDH）微量法

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商品屬性：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研測定意義
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

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