犬內(nèi)皮素1（ET-1）酶聯(lián)免疫試劑盒

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產(chǎn)品名稱	犬內(nèi)皮素1(ET-1)酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱	Canine endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit
包裝規(guī)格	48Ｔ/96Ｔ

犬內(nèi)皮素1(ET-1)酶聯(lián)免疫試劑盒※包被抗原
1. 用50mM 的碳酸鹽包被緩沖液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原濃度為10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶標(biāo)板，4℃放置過夜。
2. 第二天棄去包被液后，用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時(shí)。
3. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對(duì)照樣品，37℃孵育2 小時(shí)。
4. PBST 洗滌5 次后，加入100μl 稀釋后的HRP 標(biāo)記的二抗，37℃孵育1 小時(shí)。
5. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取A405 吸收值。
※包被細(xì)胞
1. 在96 孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞數(shù)為1 x 104 cells/well，37℃過夜培養(yǎng)。
2. 第二天用PBS 洗滌培養(yǎng)板2-3 次。
3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀釋）, 室溫下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗滌培養(yǎng)板3 次，并晾干，儲(chǔ)藏在2-8℃?zhèn)溆谩?/span>
5. 用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時(shí)。
6. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對(duì)照樣品，37℃孵育2 小時(shí)。，加入100 μl 稀釋后的HRP 標(biāo)記的二抗,37℃孵育1 小時(shí)。
8. PBST 洗滌
7. PBST 洗滌5 次后5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取A405 吸收值。50mM 的碳酸鹽包被緩沖液：0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸餾水稀釋至100 ml。

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