實(shí)驗(yàn)方法步驟:
特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):蠟樣芽胞桿菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管
貨號(hào):YS-01P6366
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.2PCR管
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運(yùn)輸:低溫
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
N-芐氧羰基乙二鹽鹽 98%印刷標(biāo)簽,小號(hào), 25mm*100mm小鼠前列腺G/H合1(PTGS1)免疫試劑盒
高氯鋅,六水 試劑級(jí)印刷標(biāo)簽,超小號(hào),尺寸: 18mm*100mm小鼠前列腺F(PGF)免疫試劑盒
玉米核 97%21mm空白小標(biāo)簽 21mm小鼠前列腺E2合成(PGES)免疫試劑盒
N-α-芐氧羰基-L-2,4-二氨基丁 99%阿拉丁免檢小標(biāo)簽 125mm*32mm小鼠前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒
酵母聚糖 A阿拉丁免檢大標(biāo)簽 160mm*60mm小鼠前列腺E1(PGE1)ELISA試劑盒
乙 >99.5%(GC)有發(fā)票此處開(kāi)封 標(biāo)簽 140*20mm小鼠前列腺D2(PGD2)免疫試劑盒
乙 AR,99.0%內(nèi)有貨單此處開(kāi)封 標(biāo)簽 140*20mm小鼠前列環(huán)(PGI2)免疫試劑盒
乙 99.5%易碎物品 標(biāo)簽 150*120mm小鼠前白蛋白(PA)免疫試劑盒
乙 99%L-乳鈣 USP級(jí)小鼠葡萄糖依賴(lài)性胰島釋放多肽(GIP)免疫試劑盒
乙 standard for GC, ≥99.5% (GC)(-)-乳乙酯 98%小鼠葡萄糖激(GCK)免疫試劑盒
2-乙酰基- 98%(-)-乳乙酯 99%小鼠葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)免疫試劑盒
乙酐 GR(易制品)(-)-乳乙酯 光致抗蝕劑級(jí),99%小鼠葡萄糖6磷脫氫(G6PD)免疫試劑盒
反式 CP,97.00%L-乳 85-90%小鼠破傷風(fēng)(Tetanus)抗體免疫試劑盒
脫氫乙鈉 99%DL-乳 ACS, ≥85%小鼠破骨分化因子(ODF)免疫試劑盒
脫氫乙 98%L-乳鈉 AR,60%水溶液小鼠蘋(píng)果脫氫(MDH)免疫試劑盒
蠟樣芽胞桿菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管大黃 Rhein六-2,4-戊二酮鋁載脂蛋白H抗體
膽固醇酯(豬胰)雙氯芬二磷腺核糖基轉(zhuǎn)移4抗體
人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒,雙氯芬AKIRIN2蛋白抗體
人熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒,雙氯芬ADP核糖基化樣因子8B抗體
小鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒,N-Boc-2,2′-(亞乙二氧基)二乙三磷腺家族蛋白2抗體
小鼠抗中性粒核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒,4-MorpholinecarbonitrileAKIRIN1蛋白抗體
小鼠蛋白激B(PKB)ELISA試劑盒,1-溴異喹啉錨定蛋白樣蛋白1抗體
小鼠血紅氧合2(HO-2)ELISA試劑盒,1-溴異喹啉腺激2抗體