實(shí)驗(yàn)方法步驟:
特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:霍亂弧菌核酸檢測(cè)試劑盒48T
貨號(hào):YS-01P6328
產(chǎn)品規(guī)格:48T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運(yùn)輸:低溫
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過程。
4. 檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
5-溴-2-苯 97%甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.9%豬心型脂肪結(jié)合蛋白(FABP3/FABP11/MDGI)免疫試劑盒
5-溴-5-硝基-1,3-二惡烷 98%甲 電子級(jí)豬心鈉肽(ANP)免疫試劑盒
Nα-苯甲酰-DL-精氨酰-β-萘 97% 甲 ACS 光譜級(jí), ≥99.9%豬心肌特異性肌鈣蛋白T(c)免疫試劑盒
赫斯特?zé)晒馊剂希?/span>33258 98%甲 LC-MS,≥99.9%豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫試劑盒
苯并[e]芘 分析標(biāo)準(zhǔn)品甲 色譜級(jí)+, ≥99.9%豬?;oA去飽和(SCD)免疫試劑盒
戊丁酯 ≥98.0 %甲 無(wú)酮,用于Romanowsky甲染色法豬纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)免疫試劑盒
3-溴基叔丁基二甲基硅 97%甲 蛋白測(cè)序級(jí),≥99.9%豬纖溶原激活物抑制因子(PAI)免疫試劑盒
抗氧劑618 試劑級(jí)甲 梯度色譜級(jí), ≥99.9%豬色C氧化(COX)免疫試劑盒
1,3-丁二烯溶液 20 wt. % in toluene甲 HPLC, ≥99.5%,用于制備豬色c還原(CCR)免疫試劑盒
硅鈣 分析標(biāo)準(zhǔn)品N-氨乙基哌 99%豬間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒
氯苯靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%二甘 98%豬間粘附分子2(ICAM-2)免疫試劑盒
氯苯靈 98%二乙烯三 Standard for GC,>99%(GC)豬戊糖(PE)免疫試劑盒
野百合 分析標(biāo)準(zhǔn)品二乙烯三 CP,97%豬瘟抗體免疫試劑盒
環(huán)戊烷 99%(GC)二乙烯三 97%豬瘟抗體(IgM)免疫試劑盒
4-氯-3-酚 99%二乙烯三 二乙烯三 99%豬瘟抗體(IgG)免疫試劑盒
霍亂弧菌核酸檢測(cè)試劑盒48T卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒--動(dòng)物,人DL-阿拉伯糖氨基糖類磷結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人DL-阿拉伯糖唾液糖蛋白受體1抗體
氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人DL-阿拉伯糖芳香基硫酯F抗體
神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人N-Acetyl-Val-Ala-Asp-alA激錨定蛋白5抗體
前列腺E2(PGE2)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人4,4′-(六異亞基)二酚小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體
小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒,4,4′-(六異亞基)二酚ASTE1蛋白抗體
小鼠葉(FA)ELISA試劑盒,4,4′-(六異亞基)二酚磷化自噬相關(guān)蛋白4B抗體
小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒,4,4′-(六異亞基)二酚微絲相關(guān)蛋白1抗體