實(shí)驗(yàn)方法步驟:
特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):腸出血性大腸桿菌O104核酸檢測(cè)試劑盒48T
貨號(hào):YS-01P6334
產(chǎn)品規(guī)格:48T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運(yùn)輸:低溫
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 序列資源豐富,除公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
1,2-二乙基苯 Standard for GC,≥99.0% (GC)正丁硫 97%豬藍(lán)耳病(PRRSV)抗體(IgG)免疫試劑盒
二硫代乙酰 98%芐硫 98%豬賴(lài)氨酰氧化免疫試劑盒
1,1-二苯-2-苦基肼 96%二糠基硫 98%豬口蹄疫抗體免疫試劑盒
二氯甲 98%2,3-二乙基-5-甲基吡 98%豬口蹄疫抗體(IgM)免疫試劑盒
4,4'-二氯二苯甲酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品二乙硫 97%豬口蹄疫抗體(IgG)免疫試劑盒
鄰苯二甲二異辛酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5% (GC)2,3-二甲基吡 98%豬可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒
二氫辣椒 分析標(biāo)準(zhǔn)品 2,5-二甲基吡 98%豬可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)免疫試劑盒
二異丁基酮 99%5-羥甲基糠 98%豬可溶性間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒
1,7-二氨基庚烷 98%5-羥甲基糠 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%豬可溶性P選擇(sP-Selectin)免疫試劑盒
1,2-二 分析標(biāo)準(zhǔn)品5-羥甲基糠 99%豬抗中性粒彈性蛋白抗體(ANEA)免疫試劑盒
4,4-二溴聯(lián)苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品1,6-己二硫 97%豬巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
色標(biāo)GStandard for GC,≥99.5% (GC)異香草 98%豬巨噬遷移抑制因子(糖基化抑制因子)(MIF)免疫試劑盒
二基硅烷 98%丁甲硫酯 98%豬金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒
3,4-二二苯甲酮 98%甲硫 99%豬結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒
2,4-二肼 ~0.005 M in ethanol, for TLC 吡 99%豬窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒
腸出血性大腸桿菌O104核酸檢測(cè)試劑盒48T小鼠β葡糖(β-glucosidase)ELISA試劑盒,3-甲氧基氮雜環(huán)丁烷鹽鹽三磷腺結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體
小鼠甲狀腺(T4)ELISA試劑盒,四正辛基三磷腺結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體
兔子可溶性E選擇(sE-selectin)ELISA試劑盒,四正辛基ADCK1蛋白抗體
促胃液受體(GsaR)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人四正辛基?;oA結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人碳雙(三苯基膦)氯化銥α/β水解4抗體
抗甲型肝炎病IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人碳雙(三苯基膦)氯化銥ADCK2蛋白抗體
結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人(2,2-Bipyridine)Dichloropalladium(Ⅱ)乙脫氫16家庭A1抗體
紅生成(EPO)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人順-二氯雙(吡啶基)鉑(II)粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體