詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)商 | Pirital virus(PIRV)RTPCR | PCR檢測試劑盒 |
實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
Anecortave Acetate20mg/支RALA+RALB Ras樣蛋白A+B體ELISA Kit for Heat Shock Protein 90kDa Beta 1 (HSP90b1)
20mg/支RASGAP RAS的GTP酶激活蛋白體ELISA Kit for Phospholipase A2, Lipoprotein Associated (LpPLA2)
Anethole (AS)20mg/支RIAM/APBB1 interacting protein 1 β淀粉樣蛋白前體結(jié)合蛋白B-1體ELISA Kit for Phospholipase A2, Lipoprotein Associated (LpPLA2)
1,6-anhydro-D-glucose20mg/支Rab11 ras癌因家族Rab11蛋白體ELISA Kit for Phospholipase A2, Lipoprotein Associated (LpPLA2)
Anileridine Hydrochloride CII20mg/支RAB2/RAB2A ras癌因家族Rab2體ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial (NOS3)
Anisole20mg/支RAB5 ras癌因家族Rab5蛋白體ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial (NOS3)
Antazoline Phosphate20mg/支RAB8 ras癌因家族Rab8蛋白體(原癌因c MEL)ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial (NOS3)
Anthralin20mg/支RAB9 ras癌因家族Rab9蛋白體ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 2, Inducible (NOS2)phospho-c-ABL (Tyr115)英文名稱:Annexin VI人型肝炎病前S2原(HBV preS2Ag)免疫試盒
phospho-c-Abl (Thr754 + Thr735) 英文名稱:beta-Amyloid(25-35)人型肝炎病前S2體(HBV preS2Ab)免疫試盒
phospho-c-ABL (Tyr245)英文名稱:Angiotensin I人型肝炎病核心體IgM(HBcAb-IgM)免疫試盒
phospho-c-ABL(Thr413) 英文名稱:Adrenomedullin人型肝炎病核心體IgG(HBcAb-IgG)免疫試盒
phospho-c-ABL(Tyr204)英文名稱:Arfaptin 2人型肝炎病核心體(HBcAb)免疫試盒
phospho-c-ABL (Thr754)英文名稱:AVPR2人型肝炎病表面體(HBsAb)免疫試盒
Cenexin1英文名稱:ASC人型肝炎病X原(HBxAg)免疫試盒
C5orf19 英文名稱:Afadin人型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)免疫試盒
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)商原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。