詳細介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
通用PCR檢測試劑盒供應商 | LentivirusRTPCR | PCR檢測試劑盒 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
MTLR 胃動受體體進口/國產(chǎn)CCDC7 卷曲螺旋結構域蛋白7體
MTTP 微粒體甘油三酯轉運蛋白進口/國產(chǎn)CCDC80 卷曲螺旋結構域蛋白80體
MVD 羥戊脫羧酶體進口/國產(chǎn)CD163L1 CD163蛋白樣1體
CA15-3/Muc1 粘蛋白-1/上皮膜原體進口/國產(chǎn)CDAN1 先天性紅細胞生成異常性貧血蛋白1體
Muc2 粘蛋白-2/上皮膜原2體進口/國產(chǎn)CDK2AP2 細胞周期依賴激酶2相關蛋白2體
mucin3/Muc3 粘蛋白-3體進口/國產(chǎn)CEACAM21 癌胚原相關細胞粘附分子21體
mucin 5B/Muc5B 粘蛋白-5B體進口/國產(chǎn)CDKAL1 周期依賴性激酶5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1體酒石鈉中藥對照藥材進口/國產(chǎn)INCA1 INCA1蛋白體進口/國產(chǎn)Lep IgG(Human Leptospira IgG) ELISA Kit 人鉤端螺旋體IgG小鼠內(nèi)皮1(ET-1)ELISA Kit,48T/96T 進口、國產(chǎn)鈉中藥對照藥材*MS4A3/CD20L CD20樣蛋白體(造血干細胞4跨膜蛋白3)進口/國產(chǎn)Human Amebiasis ELISA Kit 人阿米巴豬內(nèi)皮1(ET-1)ELISA Kit,48T/96T 進口、國產(chǎn)月桂鈉中藥對照藥材*Amylin 糖尿病相關肽/胰島淀粉樣肽體進口/國產(chǎn)VCAM-1/CD106 ELISA kit 大鼠血管內(nèi)皮細胞粘附分子大鼠內(nèi)皮1(ET-1)ELISA Kit,48T/96T 進口、國產(chǎn)油鈉中藥對照藥材*SPDYA 細胞周期G2/M期快速誘導蛋白SPDYA體進口/國產(chǎn)IL-8/CXCL8 ELISA Kit 大鼠白介8兔子內(nèi)皮1(ET-1)ELISA Kit,48T/96T 進口、國產(chǎn)
通用PCR檢測試劑盒供應商原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。