茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書

PCR基本操作：
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原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
MLH1/hMLH 1  錯配修復(fù)蛋白1體進口/國產(chǎn)BEX4  表達X連鎖蛋白4體

Mesothelin  間皮體進口/國產(chǎn)ABCA5  三苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A亞5體

MUC5AC/Mucin 5AC  胃粘液體進口/國產(chǎn)BTBD7  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7體

MTF-1  金屬應(yīng)答元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-1體進口/國產(chǎn)GUSB/beta glucuronidase  β葡萄糖醛苷酶體

MTHFR  亞四葉還原酶MTHFR體進口/國產(chǎn)CA13  碳酐酶

MTNR1A/MTR-1A/MEL-1A-R  褪黑受體1A/松體受體1A體進口/國產(chǎn)HOXC9  同源盒蛋白HOXC9體

MTNR1B  褪黑受體1B體進口/國產(chǎn)CA6  碳酐酶6體Lipocalin 2英文名稱：phospho-MEK1 (Thr386)20號染色體開放閱讀框30體

NF2英文名稱：MHC Class II20號染色體開放閱讀框4體

NIR1英文名稱：Phospho-mTOR (Tyr144)20號染色體開放閱讀框7體

Natrexone英文名稱：MeCP220號染色體開放閱讀框79體

Phospho-NDRG1 (Ser330)英文名稱：Phospho-mTOR (Thr2446) 20號染色體開放閱讀框94體

Phospho-NDRG1 (Thr346)英文名稱：MT-ND621號染色體開放閱讀框37體

NEDD4L英文名稱：MAGEA1122號染色體開放閱讀框15體

Phospho-NF2(Ser518)英文名稱：Msx222號染色體開放閱讀框13體