愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書

PCR基本操作：
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原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257)  化絲裂原活化蛋白激酶激酶4體進口/國產(chǎn)DQX1  DQX1蛋白體

Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261)  化絲裂原活化蛋白激酶激酶4體進口/國產(chǎn)DPP9/DPRP2  二肽肽酶9體

Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261)  化絲裂原活化蛋白激酶激酶4體進口/國產(chǎn)DPP8/DPRP1  二肽肽酶8體

phospho-MEK5(Ser311+Thr315)  化絲裂原活化蛋白激酶激酶5體進口/國產(chǎn)Matriptase 2  膜型絲蛋白酶2體

phospho-MEK5(Ser129)  化絲裂原活化蛋白激酶激酶5體進口/國產(chǎn)CYBR1  細胞色B還原酶1體

MEK6  絲裂原活化蛋白激酶MKK6體進口/國產(chǎn)UQCRC1  輔酶細胞色C還原酶核心蛋白1體

Phospho-MEK6 (Ser207)  化絲裂原活化蛋白激酶MKK6體進口/國產(chǎn)TXNRD1  硫氧環(huán)蛋白還原酶1體Ninjurin 1英文名稱：LETM119號染色體開放閱讀框55體

Ninjurin 2英文名稱：LDHA19號染色體開放閱讀框56體

NEK3英文名稱：phospho-LKB1 (Thr363)19號染色體開放閱讀框57體

NEK2英文名稱：Laminin Beta 119號染色體開放閱讀框61體

Neurogranin英文名稱：LPLUNC119號染色體開放閱讀框77體

Neuropeptide S英文名稱：LIFR核DNA結合蛋白C1D體

Neuropeptide S英文名稱：lamin A + C1號染色體開放閱讀框58體

NPSR1英文名稱：Lamin B21號染色體開放閱讀框66體