詳細介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒 | Encephalomyocarditis Virus(EMCV) RTPCR | PCR檢測試劑盒 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
20mg/支NIT1 腈水解酶1體ELISA Kit for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP)
Allantoin20mg/支RASSF3 Ras相關(guān)區(qū)域家族1A體ELISA Kit for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP)
Alliin20mg/支NPR2L/G21 protein G21蛋白質(zhì)體ELISA Kit for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP)
Allopurinol20mg/支XAB2/SYF1 XAB2蛋白體ELISA Kit for Carbonic Anhydrase I (CA1)
20mg/支PDGFRL 血小板源性生長因子受體β樣蛋白體ELISA Kit for Carbonic Anhydrase I (CA1)
20mg/支PDSS2 抑癌蛋白DLP1體ELISA Kit for Carbonic Anhydrase I (CA1)
20mg/支PHAP1 蛋白酶2A抑制1體ELISA Kit for Lipase, Endothelial (LIPG)
20mg/支POU6F2 轉(zhuǎn)錄因子RPF1體ELISA Kit for Lipase, Endothelial (LIPG)NRXN3英文名稱:MGLUR2 + MGLUR3緊密連接蛋白20體
NPD014英文名稱:MGLUR1 + MGLUR5中心體蛋白135體
NSG2英文名稱:MICA半胱胺蛋白酶蛋白-7體
NEDD4英文名稱:MURF2鈣調(diào)節(jié)體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào))
NCE2英文名稱:MURF31號染色體開放閱讀框181體
CCDC136英文名稱:phospho-MST1R(Tyr1353) Ⅰ型補體受體體(C3b/C4b受體體)
NEU4英文名稱:MAPK138型膠原/內(nèi)皮膠原蛋白體
N acetylglucosamine kinase英文名稱:Multicilin結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1體
腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。