谷氨酰胺合成酶（GS)微量法

谷氨酰胺合成酶（GS)微量法公司正在熱銷的產(chǎn)品：GOD人葡萄糖氧化酶ELISA檢測(cè)試劑盒
GKRP人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒
GCK人葡萄糖激酶ELISA檢測(cè)試劑盒
GPI人葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶ELISA檢測(cè)試劑盒
G6PD人葡萄糖6磷酸脫氫酶ELISA檢測(cè)試劑盒

商品屬性：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研測(cè)定意義
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過(guò)多的銨離子對(duì)生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。

測(cè)定原理

GS在ATP和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定。

所需的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測(cè)。

2. 細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血液可直接測(cè)定，或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

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