人支氣管平滑肌細(xì)胞組織解離液

人支氣管平滑肌細(xì)胞組織解離液冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱：人支氣管平滑肌細(xì)胞組織解離液
規(guī)格：3×1ml
細(xì)胞凍存步驟： 
   待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟：    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象
SRPK2  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SRPK2抗體 0.2ml
TBRG4  轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β調(diào)節(jié)蛋白4抗體 0.2ml
TLK2  絲氨酸/蘇氨酸激酶TLK2抗體 0.2ml
ANKRD28  錨蛋白重復(fù)域28抗體 0.2ml
SIPA1L2  信號(hào)誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1樣蛋白2抗體 0.2ml
DUSP7  雙特異性蛋白磷酸酶7抗體 0.2ml
PPM1B  蛋白質(zhì)磷酸酶1B抗體（PP2Cβ） 0.2ml
PPM1G  蛋白質(zhì)磷酸酶1G抗體（PP2Cγ） 0.2ml
PPP2R1A  蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1A抗體 0.2ml
PPP2R1B  蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B抗體 0.2ml
PPP2R3A  蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基3A抗體 0.2ml
SHOC2/Sur8  富含亮氨酸重復(fù)蛋白SHOC2抗體 0.2ml
RAMP/CDT2  維甲酸調(diào)節(jié)核基質(zhì)相關(guān)蛋白 0.2ml
MTMR8  肌管素相關(guān)蛋白8抗體 0.2ml
NIFK  KI67相互作用蛋白抗體 0.2ml
phospho-NIFK/MKI67IP(Thr234)  磷酸化KI67相互作用蛋白抗體 0.1ml
TACC1  乳腺癌、胃癌抗原GA55抗體 0.2ml
人支氣管平滑肌細(xì)胞組織解離液ABCF3  三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體 0.2ml
ABHD1  肺α/β水解酶蛋白1抗體 0.2ml
ABHD13  水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體 0.2ml
ABHD14B  水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14B抗體 0.2ml
ABHD15  水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體 0.2ml
ABHD3  肺α/β水解酶蛋白3抗體 0.2ml
ABHD4  α/β水解酶4抗體 0.2ml
ACBD4  ?；o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 0.2ml
ADCK1  ADCK1蛋白抗體 0.2ml
ADCK2  ADCK2蛋白抗體 0.2ml
AKR1A1  乙醇脫氫酶1抗體 0.2ml
ALAD  δ氨基乙酰脫水酶抗體 0.2ml
TPTE  腫瘤/睪丸抗原44抗體 0.2ml
ALDH16A1  乙醛脫氫酶16家庭A1抗體 0.2ml
ALG11  天門(mén)冬酰胺連接糖基化11抗體 0.2ml
ALS2CR4  肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體 0.2ml
AMIGO3  粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml
AMN1  細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體 0.2ml
ANKRD11  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體 0.2ml
ANKRD12  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 0.2ml

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。