人胃粘膜上皮細(xì)胞組織處理緩沖液

人胃粘膜上皮細(xì)胞組織處理緩沖液凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱：人胃粘膜上皮細(xì)胞組織處理緩沖液
規(guī)格：100ml
細(xì)胞凍存步驟： 
   待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟：    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象
FAS/Apo-1/CD95  載脂蛋白1抗體 0.1ml
E  胰羧肽酶E抗體 0.2ml
Myotilin  肌收縮蛋白MYOT抗體 0.1ml
PMCA  細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶抗體 0.2ml
GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基丁酸受體α3抗體 0.2ml
NCEH/AADACL1  中性膽固醇酯水解酶1抗體 0.2ml
Rab25  癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab25抗體 0.2ml
Testis  腫瘤抑制基因Testin抗體 0.2ml
ZNF288/ZBTB20  鋅指蛋白288抗體 0.2ml
ALOX15/15 Lipoxygenase 1  花生四烯酸15脂氧合酶1抗體 0.2ml
ABI3BP  ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
MTCBP1/ADI1  膜型基質(zhì)金屬蛋白酶胞質(zhì)尾結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
BCMP11/AGR3  乳腺癌膜蛋白11抗體（前梯度同源蛋白2） 0.2ml
ALDH1A1  胞質(zhì)乙醛脫氫酶1抗體 0.2ml
ABH8/ALKBH8  AlkB同源蛋白8抗體 0.2ml
AMFR/Gp78/RNF45  環(huán)指蛋白45/自分泌運(yùn)動(dòng)因子受體抗體 0.2ml
AMBP/Alpha 1 microglobulin  α1微球蛋白抗體 0.2ml
A2BP1/Fox1  共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
RLLM1/C14orf166  胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白R(shí)LLM1抗體 0.2ml
ABC2/C17orf71  乳腺癌增強(qiáng)蛋白2抗體 0.2ml
CA8  酶相關(guān)蛋白8抗體 0.2ml
CACNB1  鈣通道電壓依賴性β1蛋白抗體 0.2ml
CDK5RAP3  周期素依賴性激酶5激活結(jié)合蛋白C53抗體 0.2ml
CENPH  著絲粒蛋白H抗體 0.2ml
CKAP4  細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白4抗體 0.2ml
CRISP3  富含半胱氨酸分泌蛋白3抗體 0.2ml
CKMT/Creatine kinase MT  酸性型線粒體肌酸激酶抗體 0.2ml
SCRO/DCUN1D1  鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
DDX53/CT26  腫瘤/睪丸抗原26抗體 0.2ml
DEPDC1  細(xì)胞周期調(diào)控蛋白SDP35抗體 0.2ml
ENTPD5/CD39L4  原癌基因CD39樣蛋白4抗體 0.2ml
EST1A  端粒酶結(jié)合蛋白EST1A抗體 0.2ml
EZH1/Histone-lysine N-methyltransferase EZH1  組蛋白賴氨酸N-甲基EZH1抗體 0.2ml
phospho-KMT6/EZH2(Thr487)  磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體 0.1ml
SKALP/Elafin  彈性蛋白酶抑制劑抗體 0.2ml
Epsti1/Epithelial Stromal Interaction 1  上皮間質(zhì)相互作用蛋白1抗體 0.2ml
EIG121  雌激素誘導(dǎo)基因121蛋白抗體 0.2ml
FAM129A/Cell growth inhibiting gene 39 protein  細(xì)胞生長抑制基因39蛋白抗體 0.2ml
人胃粘膜上皮細(xì)胞組織處理緩沖液FOLH1B  細(xì)胞生長抑制蛋白26抗體（前列腺特異性膜抗原樣蛋白） 0.2ml
GCET2  生發(fā)中心B淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線。