葡萄糖6磷酸(6PG)可見(jiàn)分光光度法

葡萄糖6磷酸(6PG)可見(jiàn)分光光度法公司正在熱銷的產(chǎn)品：OB小鼠肥胖抑制素ELISA檢測(cè)試劑盒
CMA1小鼠肥大細(xì)胞類糜蛋白酶1ELISA方法
DEFβ2小鼠防御素β2ELISA檢測(cè)試劑盒
DEFβ1小鼠防御素β1ELISA檢測(cè)試劑盒
DEFα5小鼠防御素α5ELISA檢測(cè)試劑盒

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

商品屬性：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研測(cè)定意義
6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱6-磷酸葡萄糖)，是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物，廣泛存在于動(dòng)植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應(yīng)中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通過(guò)磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續(xù)糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其第一個(gè)底物，該過(guò)程也是生成NADPH的主要途徑。此外，葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被儲(chǔ)存起來(lái)。

測(cè)定原理：

6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，在450 nm下測(cè)定吸光值。

需自備的儀器和用品：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測(cè)。

2. 細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血液可直接測(cè)定，或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

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