酶ⅠNAD(H)可見分光光度法

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測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。

粗酶液提?。?/p>

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

Cerberus蛋白(CER)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Cerberus (CER)    96T    Mus musculus (Mouse)

HtrA酸肽酶4(HTRA4)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)    96T    Homo sapiens (Human)

紅細胞生成素(EPO)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Erythropoietin (EPO)    96T    Rattus norvegicus (Rat)

胞外超氧化物歧化酶(SOD3)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)    96T    Mus musculus (Mouse)

組蛋白H4(H4)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Histone H4 (H4)    96T    Mus musculus (Mouse)

半乳糖凝集素9(GAL9)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Galectin 9 (GAL9)    96T    Homo sapiens (Human)

補體成分5a(C5a)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Complement Component 5a (C5a)    96T    Rattus norvegicus (Rat)

雌激素受體β(ERβ)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Estrogen Receptor Beta (ERb)    96T    Homo sapiens (Human)

氨基端前腦鈉素(NT-ProBNP)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for N-Terminal Pro Brain Natriuretic Peptide (NT-ProBNP)    96T    Canis familiaris; Canine (Dog)

Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Procollagen I C-Terminal Propeptide (PICP)    96T    Homo sapiens (Human)

血小板反應蛋白(THBS1)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Thrombospondin 1 (THBS1)    96T    Mus musculus (Mouse)

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Secretory Immunoglobulin A (sIgA)    96T    Bos taurus; Bovine (Cattle)

轉甲狀腺素蛋白(TTR)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Transthyretin (TTR)    96T    Homo sapiens (Human)

生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11)    96T    Homo sapiens (Human)

C4結合蛋白β(C4BPβ)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for C4 Binding Protein Beta (C4BPb)    96T    Homo sapiens (Human)

補體因子P(CFP)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Complement Factor P (CFP)    96T    Homo sapiens (Human)

生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11)    96T    Mus musculus (Mouse)

核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒(化學發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL)    96T    Rattus norvegicus (Rat)

Tetracycline/OVA  四環(huán)素偶聯雞卵白蛋白     2mg

Oxytetracycline/BSA  土素偶聯牛血清白蛋白     2mg

Oxytetracycline/OVA  土霉偶聯雞卵白蛋白     2mg

streptomycin/OVA  鏈素偶聯血藍蛋白     5mg

Penicillin G/BSA  青G偶聯牛血清白蛋白     2mg

Penicillin G/OVA  青霉素G偶聯雞卵白蛋白     2mg

酶ⅠNAD(H)可見分光光度法streptomycin/BSA  鏈素偶聯牛血清白蛋白     2mg

streptomycin/OVA  鏈霉偶聯雞卵白蛋白     10mg

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。

注意：空白管和標準管只需測定一次。