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詳細介紹
人肝外膽管上皮原代細胞
人肝外膽管上皮細胞分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。臨床上常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]鎖、先天性膽總管囊腫、原發(fā)性硬化性膽管炎等，都是以膽管上皮細胞為病變的靶位，引起膽管上皮的損傷。了解正常膽管上皮細胞的生物學特征和病變膽管上皮細胞的病理生理學特征對研究膽管病變的發(fā)病機制、診斷和治療具有重要意義。
英文名稱 | Human Extrahepatic Bile Duct Epithelial Cells | 組織來源 | 膽管組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7533 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人肝外膽管上皮細胞
組織來源：膽管組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
方法簡介
普諾賽實驗室分離的人肝外膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化，接種至預先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中，通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
普諾賽實驗室分離的人肝外膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
原代腎實質細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml | Anti-Phospho-TrkA (Tyr785)/TrkB (Tyr816) 0酸化酪激酶A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
DDC(Human dopamine decarboxylase) ELISA Kit 人多巴胺脫羧酶 96T | Anti-MK6/FITC 熒光素標記原活化蛋白激酶MKK6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLR4/CD284 Toll樣受體4抗體 規(guī)格 0.1ml | Human Methylase ELISA Kit 人甲基化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HSD17B3： 羥類固醇脫氫酶17β3抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CCDC129 卷曲螺旋結構域蛋白129抗體 規(guī)格 0.2ml |
FBXO27： FBXO27蛋白抗體 0.2ml | ECF ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
IFNA8 Others Cynomolgus 食蟹猴 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人膀胱平滑肌細胞HBdSMC | CAMK2B Others Human 人 CAMK2B / CaMKII-beta 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
IL11RA Others Mouse 小鼠 IL11RA / IL11Rα 人細胞裂解液 (陽性對照) | XCL2 Others Human 人 XCL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
HSAEpC-c 人類氣道上皮細胞(HSAEpC) 500,000cells 子宮癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | SERPIND1 Others Human 人 SerpinD1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
倉鼠/小鼠雜交瘤細胞;145-2C11 | 人肝外膽管上皮原代細胞Human Methylase ELISA Kit 人甲基化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
CD200 Others Human 人 CD200 / OX-2 人細胞裂解液 (陽性對照) | EC9706 食管癌 |
293A，人胚腎上皮細胞系(腺病毒包裝級別) | 恒河猴腎細胞;RM-1 人胰腺癌細胞，HPAC細胞 SGC-7901(胃腺癌細胞) |
ERBB4 Others Human 人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-ProADM (Adrenomedullin)-N20 peptide /FITC 熒光素標記腎上腺髓質素前提N端20肽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OGFOD1： 末端多聚腺苷酸1蛋白抗體 0.2ml | A2(人腺樣囊性癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠黑色素瘤細胞;B16 |
Sprouty1： 軟脂?；?span>0蛋白Sprouty1抗體 0.1ml | CDO1： 半胱酸雙加氧酶1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | IFNA8 Others Cynomolgus 食蟹猴 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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