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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人羊膜成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 羊膜 |
英文名稱(chēng) | Human Amniotic Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7968 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人羊膜成纖維細(xì)胞分離自胎盤(pán)組織；胎盤(pán)（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤(pán)從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤(pán)還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類(lèi)和魚(yú)類(lèi)也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱(chēng)假胎盤(pán)。羊膜是胎盤(pán)的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì)，其光滑，無(wú)血管、及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜成纖維細(xì)胞主要來(lái)自基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人羊膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
CEM細(xì)胞，白血病細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞,PC-3M細(xì)胞 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞總RNAHIBEpiC NA | Rhesus antibody Rh GFAP 膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
AFP(Human Alpha-fetoprotein) ELISA Kit 人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml |
IRS1： 胰島素受體底物-1抗體 0.2ml | LMA(Human anti-liver cell membrane antibody) ELISA Kit 人抗肝細(xì)胞膜抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGAG4 RGAG4蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Lck/p56-LCK/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Ser192) 0酸化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶1 規(guī)格 0.1ml | BDNF(Mouse Brain derived neurotrophic facor) ELISA Kit 小鼠腦源性營(yíng)養(yǎng)因子 96T |
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 | CM-R040大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
小鼠T淋巴細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 Mouse |
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 | COLO 201(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 | 小鼠肝星形細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
CCC-HEK-1細(xì)胞，人胚腎二倍體細(xì)胞 鼠逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細(xì)胞,PT67細(xì)胞 CL-0398NCI-H2452(人間皮瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人羊膜成纖維原代細(xì)胞LMA(Human anti-liver cell membrane antibody) ELISA Kit 人抗肝細(xì)胞膜抗體 96T |
CL-0227T-24(人膀胱癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;PUMC-HUVEC-T1 人膀胱成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
IGSF8 Others Human 人 PGRL / IGSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H068人膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | Rhesus antibody Rh APIP/Apaf1 Interacting Protein 凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
BACH2： 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白BACH2抗體 0.2ml | CM-R058大鼠膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
Anti-TrK A.B.C/TrK /FITC 熒光素標(biāo)記酪激酶A.B.C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PSMD12： 26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型p55抗體 0.1ml |
Anti-Phospho-cdc2 (Thr14)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化周期素依賴(lài)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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