兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)原代細(xì)胞

兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代頜下腺上皮細(xì)胞 ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞) SMC 兔主動脈平滑肌細(xì)胞 1ml/T75 CW-2 人結(jié)腸癌細(xì)胞 MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 Human 小鼠原代羊膜間質(zhì)細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的兔三叉星形膠質(zhì)采用消化法結(jié)合差速貼壁法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔三叉星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

兔三叉星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自三叉組織；三叉為粗大的混合性腦，含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉運動核，纖維組成三叉運動根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內(nèi)側(cè)，后進(jìn)入三叉第3支下頜中，經(jīng)卵圓孔出顱，隨下頜分支分布于咀嚼肌等。運動根內(nèi)還含有三叉中腦核有關(guān)的纖維，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺。三叉內(nèi)以軀體感覺纖維為主，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉節(jié)（半月節(jié)）內(nèi)，該節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。膠質(zhì)細(xì)胞是組織中除元以外的另一大類細(xì)胞，也有突起，但無樹突和軸突之分，廣泛分布于中樞和周圍系統(tǒng)。在哺乳類動物中，膠質(zhì)細(xì)胞與元的細(xì)胞數(shù)量比例約為10：1。在中樞系統(tǒng)（CNS）中的膠質(zhì)細(xì)胞主要有星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞（與前者合稱為大膠質(zhì)細(xì)胞）和小膠質(zhì)細(xì)胞等。傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細(xì)胞屬于結(jié)締組織，其作用僅是連接和支持各種成分，其實膠質(zhì)還起著分配營養(yǎng)物質(zhì)、參與修復(fù)和吞噬的作用，在形態(tài)、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織。星形膠質(zhì)前體細(xì)胞主要表達(dá)Vimentin，而成熟之后表達(dá)Vimentin和膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP），故GFAP被認(rèn)為是星形膠質(zhì)細(xì)胞成熟的標(biāo)志物。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔三叉星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

公司產(chǎn)品：