詳細(xì)介紹
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;M619*懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;M619*
形態(tài)特性 多角
品牌 貼壁生長
特征特性 STR檢測發(fā)現(xiàn)三株人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞C918、M619和Mum-2B為同一遺傳背景,懷疑存在交叉污染。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS;20mM Hepes
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,11;D13S317:11;D16S539:8,12;D18S51:15;D19S433:13,14;D21S11:30;D2S1338:24,25;D3S1358:16;D5S818:11,12;D7S820:12;D8S1179:13;FGA:20,21;TH01:8,9.3;TPOX:11;vWA:16,17;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;M619*貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;M619*操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-TNK1/FITC 熒光素標(biāo)記非受體型酪氨酸蛋白激酶Tnk1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
碳酸酐酶2抗體 Anti-CA Ⅱ 0.1ml
SEMA4B 英文名稱: 跨膜蛋白SEMA4B抗體 0.2ml
E2F1 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-HSF1(Ser307) 磷酸化熱休克因子1抗體 規(guī)格 0.1ml
CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Trop-2/Tpm2 peptide 原肌球蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CAP2 環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PDE4A8 磷酸二酯酶4A8抗體 規(guī)格 0.2ml
HA Kit Influenza 甲型流感 H1N1 (豬流感 2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配對抗體 ELISA
THYN1 英文名稱: 胸腺細(xì)胞核蛋白1抗體 0.1ml
phospho-c-Jun(Ser63) 英文名稱: 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
Anti-CAP2 環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠Apelin大鼠13蛋白(AP13)ELISA試劑盒,英文名:AP13 ELISA KiISA Kit for Human Mu-type opioid receptor大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒,英文名:Casp-9 ELISA KiISA Kit for Human Retrotransposon-derived protein PEG*鼠雌酮(E1)ELISA試劑盒,英文名:E1 ELISA KiISA Kit for Human Parathyroid hormone-related protein大鼠Toll樣受體2(TLR-2)ELISA試劑盒,英文名:TLR-2 ELISA KiISA Kit for Human Reactive oxygen species modulator 1大鼠組蛋白H2B(H2B)ELISA試劑盒,英文名:H2B ELISA KiISA Kit for Human Sortilin-related receptor大鼠纖維蛋白肽A(FPA)ELISA試劑盒,英文名:FPA ELISA KiISA Kit for Human Pigment epithelium-derived factor大鼠親環(huán)素B(CYPB)ELISA試劑盒,英文名:CYPB ELISA Kit
人P5C脫氫酶(P5C dehydrogenase)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒,英文名:TNFsR-Ⅰ ELISA KiISA Kit for Human Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶23B(MMP23B)ELISA試劑盒,英文名:MMP23B ELISA KiISA Kit for Human Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1大鼠淀粉樣蛋白β前體蛋白結(jié)合蛋白B3(APBB3)ELISA試劑盒,英文名:APBB3 ELISA Kit大鼠γ-分泌激活蛋白(γSAP)ELISA試劑盒,英文名:γSAP ELISA Kit豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒,英文名:OVA sIgE ELISA KiISA Kit for Human Axin-1小鼠胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)ELISA試劑盒,英文名:IGF-1R ELISA KiISA Kit for Human Alpha-1A adrenergic receptor小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF/FGF-1)ELISA試劑盒,英文名:aFGF/FGF-1 ELISA Kit
廣譜非預(yù)染蛋白Marker分子量標(biāo)準(zhǔn)(5-250kDa) 2x250μl/100次 MBI原裝
ZNF474 英文名稱: 鋅指蛋白474抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-DAXX (Ser213) 磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
GATA-3(GATA binding factor 3) GATA結(jié)合蛋白3抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
phospho-DNA PKcs (Ser2612) 英文名稱: 磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體 0.1ml
EPHB2 EPHB2 / Hek5 兔單抗 (PE) Human
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;M619*AFP-L2(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2) ELISA Kit 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HDAC7 組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MK6 原活化蛋白激酶MKK6抗體 規(guī)格 0.1ml
ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit 人酸性磷酸酶 96T
ROR alpha 英文名稱: 維相關(guān)孤兒受體α抗體 0.2ml
C1orf43 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框43抗體 0.2ml
Anti-HDAC7 組蛋白去乙?;?抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml