細胞名稱  EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMYM培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣

品牌 懸浮生長

特征特性 該細胞系來源于一成年女性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS

傳代方法 1：

2傳代；5-6天一次  

傳代情況 P2

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 熒光法（-）　

STR -

同工酶

染色體

使用權限 A類

EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMYM培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMYM培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-CD8/PE 熒光素藻紅蛋白標記兔抗人、大、小鼠CD8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Artemin抗體 Anti-ART 0.1ml

ZBTB25 英文名稱： 鋅指蛋白46抗體 0.2ml

DAP1 英文名稱： 死亡相關蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-EIF4EBP1(Ser111) 磷酸化eIF4E結合蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
USF-1(upstream stimulatory factor 1) 上游刺激因子1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCNA-Proliferation Marker 增殖細胞核抗原抗體 規(guī)格 0.1ml

DKK3 Kit Human 人 DKK3 / Dkk-3 / REIC ELISA配對抗體 ELISA

TMEM2L 英文名稱： 跨膜蛋白2樣蛋白抗體 0.2ml

CEBP Beta 英文名稱： 轉錄調節(jié)因子C/EBP β抗體 0.1ml

Anti-Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
人多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1(PARP-1)ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠α肌動蛋白(α Actin)ELISA試劑盒，英文名：α Actin ELISA Kit人的兒茶酚氧位甲基轉移酶(COMT)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)ELISA試劑盒，英文名：BALP ELISA KiISA Kit for Human T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒，英文名：E ELISA Kit人胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠γ-氨基丁酸(GABA)ELISA試劑盒，英文名：GABA ELISA KiISA Kit for Human Monocyte differentiation antigen CD14小鼠cAMP反應元件結合蛋白(CREB)ELISA試劑盒，英文名：CREB ELISA Kit人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠白細胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒，英文名：IL-6 ELISA KiISA Kit for Human Protein deltex-1小鼠粘蛋白5B(MUC5B)ELISA試劑盒，英文名：MUC5B ELISA Kit

人含蛋白2激進的S-腺苷甲硫氨酸域(RSAD2)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠白細胞介素10(IL-10)ELISA試劑盒，英文名：IL-10 ELISA KiISA Kit for Human Endoglin小鼠微粒體谷胱甘肽S轉移酶1(MGST1)ELISA試劑盒，英文名：MGST1 ELISA KiISA Kit for Human Heparin-binding growth factor 2小鼠巰基丙酮酸硫轉移酶(MPST)ELISA試劑盒，英文名：MPST ELISA KiISA Kit for Human Gastrin小鼠激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒，英文名：KLK4 ELISA KiISA Kit for Human 10 kDa heat shock protein, mitochondrial小鼠防御素β2(DEFβ2)ELISA試劑盒，英文名：DEFβ2 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-22小鼠白介素27(IL27)ELISA試劑盒，英文名：IL27 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-15小鼠CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒，英文名：CD40L ELISA Kit
山羊抗大鼠 IgG(H+L)/Biotin 0.1ml 美國Jackson公司分裝

VAT1 英文名稱： 嗜鉻顆粒胺轉運蛋白VAT1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 磷酸化粘附相關激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

Neurocan 神經(jīng)粘蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

DAP12 英文名稱： 自然殺傷激活受體相關蛋白DAP12抗體 0.1ml

Anti-ATH III 凝血酶Ⅲ抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMYM培養(yǎng)VEGF-C ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子CMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti- Gamma-Adaptin/FITC 熒光素標記銜接蛋白γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FAM82A1/RMD2 微管動力調節(jié)蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

8-OHdG(Mouse 8-Hydroxy-desoxyguanosine) ELISA Kit 小鼠8羥基脫氧鳥苷 96T

Myocardin 英文名稱： 促血管平滑肌細胞分化因子抗體 0.2ml

Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198) 英文名稱： 磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體 0.1ml

Anti- Gamma-Adaptin/FITC 熒光素標記銜接蛋白γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMYM培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。